[發明專利]一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法

無效

• 申請號: 201210004340.2
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102532077A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 徐新軍;謝春燕;謝鷙生;黃潔云;楊梅;王建;王大沖
• 申請（專利權）人: 中山大學;回音必集團（江西）東亞制藥有限公司
• 主分類號: C07D307/86
• 分類號: C07D307/86
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法，其特征在于：丹參藥材先用含乙醇的水溶液提取，經有機溶劑萃取得到浸膏，以浸膏為原料，以快速制備色譜為分離手段，以甲醇-水為洗脫體系，最終制得丹酚酸B；具體步驟為：

(1)藥材處理：丹參藥材以1∶10～20的料液比(m/v)，用體積分數30％～80％的乙醇-水溶液，超聲提取0.5～2h，過濾，濾液60℃以下減壓濃縮至為原體積的1/2～1/4，過濾，濾液用乙醚萃取，乙醚用量與濃縮液體積比為0.5～1；水層加酸調節pH為3～4，過濾獲得水層清液，水層清液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層減壓濃縮至干，得到乙酸乙酯浸膏；

(2)樣品處理：乙酸乙酯浸膏加體積分數10％～70％的甲醇-水溶解，得濃度為30～60mg·mL^-1的樣品溶液，離心，取上清液，得到樣品溶液；

(3)色譜柱預處理：快速制備色譜選擇制備型中低壓液相色譜柱，以洗脫體系溶液平衡色譜柱；洗脫體系溶液為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積分數為25％～50％；

(4)進樣：將步驟(2)獲得的樣品溶液進樣，進樣體積為1～5mL；

(5)洗脫：采用洗脫體系溶液洗脫，流速控制在3～5mL·min^-1，收集洗脫液；洗脫體系溶液為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積分數為25％～50％；

(6)丹酚酸B的獲取：收集的洗脫液經飽和后，用乙酸乙酯萃取，經濃縮和干燥得到丹酚酸B。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的提取溫度小于60℃。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述超聲提取0.5～2h后，過濾的殘渣按料液比1∶10～20的比例加入體積分數30％～80％乙醇再次提取0.5～2h，合并兩次的提取液，濾過，合并濾液，濃縮；過濾，濾液以乙醚萃取，棄去，水層調pH為3～4后，過濾，濾液再以乙酸乙酯萃取；步驟(1)調節水層為酸性采用鹽酸溶液，濃度為0.1～1mol·L^-1。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的乙醚萃取次數為1～3次，每次乙醚的用量與濃縮液的體積比為1∶0.5～1。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)所述的乙酸乙酯萃取次數為1～3次，每次乙酸乙酯的用量與水層清液體積比為1∶0.5～1。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)是以5～10倍柱體積的洗脫體系溶液平衡色譜柱。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)所述制備型中低壓色譜柱選用商品化或自己填充的中低壓色譜柱，填料為C18鍵合相填料；色譜柱填料平均粒徑為30～60μm。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(6)收集的洗脫液加入氯化鈉固體至飽和，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯層，經減壓濃縮和真空干燥得丹酚酸B，減壓濃縮和真空干燥的溫度為30℃～60℃。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(5)所述的洗脫過程采用在線紫外檢測，自動收集洗脫液，紫外檢測波長為254nm和286nm。