[發(fā)明專利]一種提高傳代細(xì)胞系凍存細(xì)胞復(fù)蘇率的復(fù)蘇方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210004302.7
• 申請日: 2012-01-09
• 公開（公告）號: CN102559573A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉長輝;王敏;邊程
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司;福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提高傳代細(xì)胞系凍存細(xì)胞復(fù)蘇率的復(fù)蘇方法，其特征在于步驟如下：

(1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管，置46-67℃水浴復(fù)蘇，融化30-70秒，加入適配營養(yǎng)液，800轉(zhuǎn)/分，離心5分，棄上清，得離心后的細(xì)胞；

(2)離心后的細(xì)胞用適配營養(yǎng)液稀釋，無菌取樣，用1％臺盼藍(lán)染色，計數(shù)活細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，計算復(fù)蘇率為95-98％；

(3)其余細(xì)胞加入適配生長液，靜止37℃培養(yǎng)5-7小時，至90-95％的細(xì)胞貼壁；

(4)更換細(xì)胞適配生長液繼續(xù)培養(yǎng)48-72小時，至細(xì)胞完全融合生長成單層；按比例傳代培養(yǎng)；完成細(xì)胞復(fù)蘇生長繁殖周期。

2.權(quán)1所述的復(fù)蘇方法，其特征在于所述的復(fù)蘇溫度為55-60℃。