[發明專利]一種冠心寧注射液中大分子物質的檢測方法

有效

• 申請號: 201210003896.X
• 申請日: 2012-01-04
• 公開（公告）號: CN102590408A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 任武賢;辛艷;禹玉洪;陳建林
• 申請（專利權）人: 亞寶藥業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明涉及醫藥領域，特別涉及一種冠心寧注射液中大分子物質的檢測方法。

背景技術

中藥注射劑化學成分復雜，種類繁多，本身又多為大分子物質，這些大分子如蛋白質、多肽、糖、鞣質、果膠等既有免疫原性，又具有免疫反應性，因此具有致敏的可能性。中藥注射劑直接作用于靜脈，起效快，但是一旦有副作用，就會產生嚴重的后果。2009年7月，國家食品藥品監督管理局出臺了“中藥注射劑安全性再評價質量控制要點”，明確要求對于具體品種的工藝條件下可能存在、而質量研究中未檢出的大類成分，應建立排除性檢查方法，必要時，應建立高分子量物質檢查項。本研究正是基于這一要求展開，建立了一種簡便快捷的方法檢測冠心寧注射液中的大分子物質，并且對于中藥注射劑中的大分子物質的排除性檢測方法的確立，目前尚無法規性的方法可參照。

發明內容

本發明的目的在于提供一種冠心寧注射液中大分子物質的檢測方法。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

本發明冠心寧注射液中大分子物質的檢測方法為凝膠色譜測定方法，該方法包括如下步驟：

色譜條件：色譜柱為TSKgel?G3000PWXL(7.8mm×300mm)；流動相為水溶液；流速0.5-0.12ml/min；柱溫25-35℃；進樣量3-8μl；

蒸發光散射檢測器條件漂移管溫度：108-112℃；載氣(空氣)流速：2.5-3.5ml/min；

精密稱取相對分子質量分別為2500，4600，7100，10000，21400的右旋糖酐對照品5份，用水溶液配制成各0.8-1.2mg/ml的溶液，即得對照品溶液I，同時取水溶液作空白對照溶液，進樣測試，以保留時間t_R為橫坐標，右旋糖酐分子質量的lgM_W為縱坐標進行回歸處理；

分別精密稱量相對分子質量為4600和10000的右旋糖酐對照品，用水溶液溶解定容，得濃度為1.95mg/mL和2.05mg/mL的溶液，即得對照品溶液II和對照品溶液III，分別連續進樣6次，測定保留時間，計算相對標準偏差RSD；

取對照品溶液II和對照品溶液III，分別稀釋至10倍、100倍、200倍、400倍、500倍、600倍，進樣分析，計算右旋糖酐對照品的最低檢出限；

取對照品溶液II和對照品溶液III，分別放置0、2、4、8h后進樣測定，計算保留時間的相對標準偏差RSD；

分別取5批冠心寧注射液，微孔濾膜濾過，進樣測定。

該方法中所述色譜條件優選為：色譜柱為TSKgel?G3000PWXL(7.8mm×300mm)；流動相為水溶液；流速0.8ml/min；柱溫30℃；進樣量5μl；

蒸發光散射檢測器條件漂移管溫度：110℃；載氣(空氣)流速：3.0ml/min；

該方法中對照品溶液I的制備方法優選為：精密稱取相對分子質量分別為2500，4600，7100，10000，21400的右旋糖酐對照品5份，用水溶液配制成各1mg/ml的溶液，即得對照品溶液I；

依據凝膠色譜的分離原理：相同實驗條件下，物質的分子質量越大，保留時間越短；分子質量越小，保留時間越長。蒸發光散射檢測器是高度穩定和靈敏的液相色譜和凝膠滲透色譜檢測器，可用于檢測在紫外光范圍內吸光度不高的化合物，如聚合物、糖、有機酸和甘油三酸酯，和示差檢測器相比，不需要平衡過長的時間，操作方便。本發明冠心寧注射液中大分子物質的檢測方法經過專屬性和線性考察、精密度、穩定性等一系列考察驗證，能夠簡便快捷的檢測冠心寧注射液中的大分子物質；從HPLC圖譜中可知所測5批冠心寧注射液樣品未檢測出分子量高于2500的大分子物質。。

下述實驗例和實施例用于進一步證明但不限于本發明。

實驗例1：

a儀器與試藥

Agilent?1200高效液相色譜儀，Alltech蒸發光散射檢測器，Mettler?Toledo?AB204-L電子天平。

右旋糖酐對照品(相對分子質量分別為2500，4600，7100，10000，21400中國藥品生物制品檢定所，批號140646-2000-01)，水為純凈水，冠心寧注射液5批(批號分別為100102、100202、100302、100402、100502，亞寶藥業集團股份有限公司提供)。

b方法與結果