[發明專利]一種檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法

有效

• 申請號: 201210002623.3
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102565382A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 李冬冬;趙文姬;張逸南
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青

1.?一種檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其首先將樣品墊、結合墊、包被有檢測線和質控線的層析膜、吸水墊依次相互交錯粘貼在底板上，構成免疫層析試紙條，然后向樣品墊中滴加血液樣本進行檢測，其特征在于：所述結合墊上結合有過敏原-生物素-親合素-乳膠微球，所述方法利用血液樣本中的過敏原特異性IgE抗體能夠與過敏原-生物素-親合素-乳膠微球結合形成結合物，以及所形成的結合物能夠在檢測線處被捕獲而呈現色帶來實現對過敏原特異性IgE抗體的定性檢測。

2.?根據權利要求1所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的過敏原-生物素-親合素-乳膠微球通過如下方法制備：首先將過敏原與生物素連接形成過敏原-生物素，將親合素與乳膠微球連接形成親合素-乳膠微球，然后再將所形成的過敏原-生物素與所形成的親合素-乳膠微球連接，即得所述的過敏原-生物素-親合素-乳膠微球。

3.?根據權利要求2所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的過敏原-生物素-親合素-乳膠微球的具體制備過程如下：

①將過敏原溶于磷酸鹽緩沖液中，將生物素溶于去離子水中，然后將生物素的水溶液滴加至過敏原的磷酸鹽緩沖液中，在室溫下攪拌，得到含有過敏原-生物素的溶液；

②將親合素溶液溶于脂肪酸甲酯磺酸鹽緩沖液中，將乳膠微球儲存液劇烈震蕩，取出微球于離心管中，離心，除去上清，加入脂肪酸甲酯磺酸鹽緩沖液，劇烈震蕩，加入溶有親合素的脂肪酸甲酯磺酸鹽緩沖液和新鮮配制的碳二亞胺溶液，劇烈震蕩，使混合均勻，在室溫暗室孵育20～40分鐘，加入吐溫-20，離心，除去上清，加入十二烷基硫酸鈉水溶液溶解微球，劇烈震蕩，離心，除去上清，加入磷酸鹽緩沖液溶解微球，劇烈震蕩，得含有親合素-乳膠微球的溶液；

③將步驟①制得的含有過敏原-生物素的溶液加入步驟②制得的含有親合素-乳膠微球的溶液中，輕輕攪拌直至微球全部懸浮起來，然后在室溫下持續攪拌10～15小時，即得含有過敏原-生物素-親合素-乳膠微球的溶液。

4.?根據權利要求4所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：通過噴涂所述含有過敏原-生物素-親合素-乳膠微球的溶液使過敏原-生物素-親合素-乳膠微球結合到結合墊上。

5.?根據權利要求1至4中任一項權利要求所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的樣品墊上包被有抗紅細胞抗體。

6.?根據權利要求1至4中任一項權利要求所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的檢測線通過包被鼠抗人IgE單克隆抗體形成。

7.?根據權利要求1至4中任一項權利要求所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的質控線通過包被羊抗人IgE的多克隆抗體形成。

8.?根據權利要求1至4中任一項權利要求所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法?，其特征在于：所述的層析膜為硝基纖維素膜。

9.?根據權利要求1至4中任一項權利要求所述的檢測血液樣本中過敏原特異性IgE抗體的免疫層析方法，其特征在于：所述的乳膠微球為聚苯乙烯微球。

10.?生物素-親合素放大系統在免疫層析法中的應用。