[發(fā)明專利]復合納米修飾絲網印刷電極及檢測伏馬毒素B1的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210002405.X
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102539499A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 嚴亞賢;王元凱;孫建和;王斌;秦易
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N33/577;G01N27/26
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種復合納米修飾絲網印刷電極，其特征在于，所述絲網印刷電極的工作電極的工作區(qū)域涂覆有多壁碳納米管-膠體金-殼聚糖混合物膜層。

2.如權利要求1所述的復合納米修飾絲網印刷電極，其特征在于，所述膠體金為16～18nm。

3.一種制備如權利要求1所述的復合納米修飾絲網印刷電極的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、將多壁碳納米管活化，并制備膠體金，利用殼聚糖將多壁碳納米管和膠體金混合均勻；

步驟二、將步驟一制得的混合物涂覆在絲網印刷電極的工作電極表面，37℃干燥成膜，即得。

4.如權利要求3所述的復合納米修飾絲網印刷電極的制備方法，其特征在于，步驟一中所述多壁碳納米管活化方法具體為：5mg多壁碳納米管溶于15ml活化溶液中，超聲30min后，9000rpm離心5min，去除上清后，加入超純水洗滌，9000rpm離心5min，去除上清，合并殘留物，60℃烘箱烘干，加入5ml水，配制成1mg/ml溶液，4℃貯存?zhèn)溆?；所述活化溶液為體積比為1∶3的HNO₃和H₂SO₄。

5.如權利要求4所述的復合納米修飾絲網印刷電極的制備方法，其特征在于，步驟一中所述膠體金的制備方法具體為：將100ml的HAuCl₄溶液加熱至沸騰，之后加入1.2ml的檸檬酸三鈉溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，即得膠體金溶液；所述檸檬酸三鈉溶液中檸檬酸三鈉質量占溶液總體積的百分比為1％，所述HAuCl₄溶液中HAuCl₄質量占溶液總體積的百分比為0.01％。

6.如權利要求5所述的復合納米修飾絲網印刷電極的制備方法，其特征在于，步驟一中所述殼聚糖與多壁碳納米管和膠體金的混合具體為：將10μl多壁碳納米管溶液和50μl膠體金溶液加入至50μl殼聚糖溶液中，超聲混勻；所述殼聚糖溶液中殼聚糖質量占溶液總體積的百分比為2％。

7.一種用如權利要求1所述的復合納米修飾絲網印刷電極檢測伏馬毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將6μl?FB1-OVA滴加在所述工作電極區(qū)域，37℃放置30min；使用0.01MPBST洗滌工作電極，晾干，滴加8μl?BSA溶液，以封閉工作電極，37℃放置30min；所述BSA溶液中BSA質量占溶液總體積的百分比為1％；

步驟二，取0.75g待測樣品，加入3ml甲醇溶液，震蕩、靜置、離心，使用0.01MPBS稀釋5倍，取5μl備用；

步驟三，將抗FB1單克隆抗體分別與不同濃度的FB1標準品和待測樣品稀釋液混合，37℃孵育60min；

步驟四，使用0.01M?PBST洗滌工作電極，晾干，滴加6μl步驟三制得的抗FB1單克隆抗體和FB1標準品或待測樣品稀釋液的混合溶液，37℃放置30min；

步驟五，使用0.01M?PBST洗滌工作電極，晾干，滴加6μ1HRP標記的羊抗鼠二抗，37℃放置30min；

步驟六，使用0.01M?PBST洗滌工作電極，并晾干，將絲網印刷電極放入10ml?pH為7.4的0.01M?PBS的緩沖液中，測定背景電流，記錄為I₀；

步驟七，將絲網印刷電極取出，使用0.01M?PBST洗滌工作電極，并晾干，放入10mlpH為7.4的0.01M?PBS的緩沖液中，再加入過氧化氫和氫醌，使其濃度分別為2mM和0.1mM，攪拌溶液20min后，停止攪拌，測定電流，記錄為I，電流變化值_ΔI＝I-I₀；

步驟八；使用Excel軟件，將FB1標準品不同濃度與相對應的_ΔI繪制標準曲線，將待測樣品相對應的_ΔI帶入標準曲線中，得到FB1濃度，并乘以稀釋因子，即為待測樣品中FB1含量。

8.如權利要求7所述的復合納米修飾絲網印刷電極檢測伏馬毒素B1的方法，其特征在于，步驟二中所述離心為3000轉離心15分鐘。

9.如權利要求7所述的復合納米修飾絲網印刷電極檢測伏馬毒素B1的方法，其特征在于，步驟二中所述甲醇溶液中甲醇與水體積比為80∶20。