[發(fā)明專利]家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210002363.X
• 申請日: 2012-01-05
• 公開（公告）號: CN102424860A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李治國;俞國華
• 申請（專利權(quán)）人: 李治國;俞國華
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.本發(fā)明提供了一種家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒包括以冬蟲夏草真菌ITS基因為靶基因、基于環(huán)介導(dǎo)恒溫擴(kuò)增技術(shù)設(shè)計的三對引物：內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3和環(huán)引物L(fēng)B/LP。

2.如權(quán)利要求1所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的三對引物為：

FIP：GTCGCAGTGGCATCTCTCAGTC-ATGCCCGCCAGAGTGC

BIP：AGGAGGGTCTGGGGGTCCTC-CAGCAGTTGCCTCGGC

F3：GGTTGAGATGACGCTCGGA

B3：CCCCCTGCGAACACCA

FL：TACTGCGCAGGGGAGC

BL：CCTGCGAACACCACAGC

3.如權(quán)利要求1所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒還包括：稀釋液、一次性移液管、反應(yīng)管。

4.如權(quán)利要求3所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的反應(yīng)管含有冷凍干燥物質(zhì)，凍干物質(zhì)含有：Bst?DNA聚合酶1～10單位/管，1.6～2mmol/L?dNTP、20～50mmol/L?Tris-HCl、10～20mmol/L?KCl、10～50mmol/L?MgSO4、0.1～0.5體積％TritonX-100、0.8～2mmol/L甜菜堿、0.2～2mol/L?HNB，內(nèi)引物FIP/BIP?0.6～1.6ummol/L、外引物F3/B30.1～0.4ummol/L、環(huán)引物L(fēng)B/LP?0.2～0.8ummol/L以上物質(zhì)溶于10～100ul水中，然后冷凍干燥處理。

5.如權(quán)利要求3所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)將待檢測、陰性和陽性樣品分別用剪刀剪成盡可能小的薄片2～8片。

(2)分別放入稀釋液中，做好標(biāo)記，蓋好管蓋，搖晃混勻，靜置。

(3)分別用一次性移液管吸取上清滴加到反應(yīng)管。

(4)用一次性移液管吸頭輕輕吹打反應(yīng)管中的底部藍(lán)色物質(zhì)，直至完全溶解。

(5)將反應(yīng)管放入恒溫反應(yīng)環(huán)境反應(yīng)。

(6)觀察反應(yīng)管顏色變化，藍(lán)色為陽性，淺紅色為陰性。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的稀釋液為水，含量為100-1500微升。

7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，恒溫反應(yīng)環(huán)境的溫度為55-70度，反應(yīng)的時間為20-200分鐘。

8.如權(quán)利要求1所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的方法包括用剪刀或者刀片剪切冬蟲夏草，取2～8片放入含水的稀釋液中，用力搖晃，釋放基因。

9.如權(quán)利要求1所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的試劑盒包含有冬蟲夏草作為陽線對照，以證明試劑盒有效。

10.如權(quán)利要求1所述的家用冬蟲夏草鑒定試劑盒及其使用方法，其特征在于，所述的試劑盒包含有亞香棒蟲草、分支蟲草、四川蟲草、湖北蟲草、安徽蟲草、古尼蟲草、尼泊爾蟲草其中的一種或者幾種作為陰性對照，以證明試劑盒有效。