[發明專利]一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201210001838.3
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN102550818A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 江瀚;馬正馳
• 申請（專利權）人: 上海創博生態工程有限公司
• 主分類號: A23K1/16
• 分類號: A23K1/16;C12N1/20;C12R1/145
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

技術領域

本發明涉及一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑，屬于微生物發酵領域。

背景技術

酪酸梭菌又名丁酸梭菌，是一種革蘭氏陽性厭氧內生芽胞桿菌。芽抱巨大，生成芽袍后或一端膨大成鼓錘狀，或中部膨脹成紡錘狀或梭狀。對禽畜無毒害作用;通過動物消化道中的生物競爭排斥作用，可抑制腸道有害菌，促進有益菌生長;能減少腸內氨、胺含量，減少肝臟負擔;產生多種維生素和微量元素;產生多種酶類，提高飼料利用率，促進動物生長。作為微生態制劑功效顯著，并能與抗生素配伍使用。酪酸梭菌現主要利用液體深層靜置培養技術，此方法產品率高但生產成本高昂，對設備環境的要求高，其固態發酵培養方法稀見報道。

發明內容

??本發明的目的在于克服現有技術成本高昂，生產條件苛刻的劣勢，提供一種工業化生產低廉、對生產條件不苛刻，且具有促生長功能的酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑。

????為了達到上述目的，本發明提供了一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，采用酪酸梭菌（菌種保藏在中國工業微生物菌種保藏管理中心，編號為CICC20036，種名butyricum，屬名Clostridium，歷史來源于四川省食品發酵工業研究設計院（1.265）），具體步驟如下：

第一步：將胰蛋白胨?2-2.5g，牛肉浸膏?1-1.5g，酵母膏0.6-1.0g，葡萄糖0.4-0.5g，磷酸氫二鉀?0.2-0.3g，磷酸二氫鉀?0.1-0.3g，硫酸鎂?0.04-0.06g，氯化鈣?0.02-0.05g，硫酸亞鐵?0.01-0.05g，半胱氨酸鹽酸鹽?0.05-0.1g，蒸餾水?100ml，配制成液體種子專用培養基，將PH值調節至7.2-7.4；將凍藏的酪酸梭菌菌種接入培養基，37-40℃靜置厭氧培養18-25h，進行種子活化；

第二步：將以質量百分比計的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸鈣0.05-0.1%、硫酸鎂0.05-0.1%、氯化鈣0.1-0.2%及剩余的水配制成固態厭氧發酵培養基；

第三步：將第一步得到的種子液接入第二步得到的固態厭氧發酵培養基中進行固態發酵；

第四步：將第三步得到的產品進行低溫烘干，粉碎，過篩，計量，包裝，制得成品。

優選地，所述的第二步中的氮源為菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一種或兩種以上的混合物。

進一步地，所述的第二步中的氮源，在作為固態發酵培養基前，先滅菌，并用中性蛋白酶進行前處理；氮源與水重量比為1:1.5-2，中性蛋白酶以1000-1500μg/g加入到氮源與水的混合物中，酶解處理3-5h。

優選地，所述的第二步中的碳源為麩皮、米糠及玉米粉中的任意一種或兩種以上的混合物與質量百分比為10%的糖蜜的混合物。

優選地，所述的第三步中的種子液的接種量的質量百分比為5-15%，培養溫度為36-40℃，靜置固態厭氧發酵時間為45-55h。

優選地，所述的第四步中的低溫烘干的溫度為38-42℃，烘干至水分的質量百分比低于8%，所述過篩的孔目為1.0目篩網。

本發明利用低廉的碳氮源基質，提供一種新型的酪酸梭菌大規模工業化生產方法，有效降低成本，增加工廠效益。

附圖說明

???圖1為本發明固體厭氧發酵接種量對酪酸梭菌活菌數及芽孢濃度的影響的數據圖；

?圖2為本發明固體厭氧發酵時間對酪酸梭菌活菌數及芽孢濃度的影響的數據圖；

???圖3為本發明固體厭氧發酵溫度對酪酸梭菌活菌數及芽孢濃度的影響的數據圖。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明作進一步說明。

實施例1

選用豆粕作為氮源；90wt%麩皮與10wt%糖蜜的混合物作為碳源。

步驟一，發酵菌體種子制備及種子活化：

1、配制液體種子專用培養基，其中胰蛋白胨?2.5g，牛肉浸膏?1.5g，酵母膏0.6g，葡萄糖0.4g，磷酸氫二鉀?0.2g，磷酸二氫鉀?0.1g，硫酸鎂?0.04g，氯化鈣?0.02g，硫酸亞鐵?0.01g，半胱氨酸鹽酸鹽?0.05g，蒸餾水?100ml，調節pH?7.2。

2、將凍藏的酪酸梭菌菌種接入培養基，37℃靜置厭氧培養18h。

步驟二，固態厭氧發酵培養基制備：

3、先將氮源滅菌，利用中性蛋白酶進行前處理；氮源加水重量比為1:2，中性蛋白酶以1000μg/g加入氮源與水的混合物中，酶解處理3h。