[發(fā)明專利]3－氯－1，2－丙二醇及其脂肪酸酯含量的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210001681.4
• 申請(qǐng)日: 2012-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN102565270A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張維農(nóng);胡志雄;齊玉堂;程鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢工業(yè)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N30/89
• 分類號(hào): G01N30/89
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 杜傳青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種3-氯-1，2-丙二醇及其脂肪酸酯含量的檢測(cè)方法。?

背景技術(shù)

3-氯-1，2-丙二醇及其脂肪酸酯是在食品加工過程中產(chǎn)生的、不易引起人們的注意、但會(huì)對(duì)廣大消費(fèi)者的健康產(chǎn)生危害的物質(zhì)。其對(duì)人體的危害表現(xiàn)在：①3-氯-1，2-丙二醇的急、慢性毒性：3-氯-1，2-丙二醇的大鼠經(jīng)口半數(shù)致死量LD₅₀為150mg/kg.bw。雄性大鼠連續(xù)經(jīng)口染毒3-氯-1，2-丙二醇1mg/kg/day以上劑量時(shí)，可以出現(xiàn)精子活動(dòng)減弱和生殖力降低，劑量大于或等于10-20mg/kg/day，可見大鼠的精子有顯著的形態(tài)學(xué)改變和附睪損傷；②3-氯-1，2-丙二醇的遺傳毒性：目前大多數(shù)研究機(jī)構(gòu)和學(xué)者認(rèn)為3-氯-1，2-丙二醇屬于非遺傳毒性致癌物，暫定每日最大耐受量(TDI)為2μg/kg.bw；③3-氯-1，2-丙二醇的致癌性：英國致癌委員會(huì)(Committee?on?carcinoginicity)認(rèn)為，3-氯-1，2-丙二醇在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中會(huì)引起致癌；而英國致變異委員會(huì)(Committee?on?Mutagenicity)認(rèn)為，3-氯-1，2-丙二醇在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，是一個(gè)非基因毒性的致癌物質(zhì)；④3-氯-1，2-丙二醇的神經(jīng)毒性：小鼠和大鼠對(duì)3-氯-1，2-丙二醇的神經(jīng)毒性作用敏感性相同，尤其是對(duì)腦干的對(duì)稱性損傷。當(dāng)3-氯-1，2-丙二醇染毒劑量大于25mg/kg.bw/day時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷呈現(xiàn)顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。?

由于3-氯-1，2-丙二醇對(duì)人體健康的危害，歐盟在2001年制訂了限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定不得超過每日20μg/kg.bw的攝入量；我國也建立了檢測(cè)醬油中3-氯-1，2-丙二醇的國家標(biāo)準(zhǔn)。由于3-氯?-1，2-丙二醇的危害性較大，在食品中要求的安全限為ppb級(jí)，且食品中的含量一般也在此級(jí)別，因此目前一般都采用靈敏度高的GC-MS方法檢測(cè)。雖然3-氯-1，2-丙二醇脂肪酸酯的危害性還無定論，但它在一定條件下很容易水解生成3-氯-1，2-丙二醇，因此油脂樣品除需檢測(cè)游離的3-氯-1，2-丙二醇外，還需檢測(cè)3-氯-1，2-丙二醇脂肪酸酯的含量。常用的3-氯-1，2-丙二醇檢測(cè)方法是先將3-氯-1，2-丙二醇進(jìn)行衍生，衍生方法有酮類衍生、硼酸類衍生(苯基硼酸、丁基硼酸)、N，O-雙三甲基-三氟乙酰胺(BSTFA)、酸酐類衍生、七氟丁酰咪唑(HFBI)等；衍生后再進(jìn)行GC-MS檢測(cè)。3-氯-1，2-丙二醇脂肪酸酯可通過酯交換反應(yīng)變成3-氯-1，2-丙二醇后進(jìn)行檢測(cè)。雖然GC-MS是目前采用的最主要的方法，但此方法存在著儀器昂貴、維護(hù)使用費(fèi)用高、需氘代標(biāo)樣作為內(nèi)標(biāo)物、對(duì)使用者業(yè)務(wù)能力要求高等缺陷，極大地限制了此檢測(cè)方法的推廣應(yīng)用，使得相關(guān)產(chǎn)品中增加3-氯-1，2-丙二醇?xì)埩袅恐笜?biāo)成為空談。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供一種操作方便、成本較低的3-氯-1，2-丙二醇含量的檢測(cè)方法。?

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案包括以下步驟：?

1)氧化：將水溶液中的3-氯-1，2-丙二醇氧化為氯乙醛；?

2)衍生化：將氯乙醛與衍生試劑反應(yīng)生成具有熒光效應(yīng)的物質(zhì)；?

3)檢測(cè)：采用HPLC-FLD方法進(jìn)行檢測(cè)，即可得3-氯-1，2-丙二醇的含量。?

所述步驟1)中，可用但不限于用高碘酸鈉作為氧化劑。優(yōu)選地，所述高碘酸鈉的濃度為0.01-0.1mol/L，添加量為所述3-氯-1，2-丙二醇水溶液體積的10-80％，反應(yīng)溫度為5-30℃，反應(yīng)時(shí)間為10-120min。?

所述步驟2)中的衍生試劑包括但不限于鳥嘌呤、腺嘌呤、巰基鳥嘌呤、胞嘧啶，其相應(yīng)核苷及核苷酸。所述衍生試劑的濃度為?0.002-0.02mol/L，反應(yīng)溫度為37-100℃，反應(yīng)時(shí)間為10-240min。?

所述步驟3)中HPLC采用反相色譜模式，固定相包括但不限于反相ODS、C12或C8填料，流動(dòng)相包括但不限于甲醇-水或乙腈-水體系，比例為5％：95％-100％：0％；FLD激發(fā)波長為260-320nm，檢測(cè)波長為350-470nm。?

所述3-氯-1，2-丙二醇水溶液可以是經(jīng)如下步驟處理動(dòng)植物油脂產(chǎn)品制得：?

a)稱取油脂產(chǎn)品質(zhì)量；?

b)加入己烷和含NaCl的乙酸溶液進(jìn)行萃取，棄去上層有機(jī)相；?

c)用己烷重復(fù)萃取一次，棄去上層有機(jī)相。?