[發(fā)明專利]一種快速準(zhǔn)確檢測(cè)番茄黃化曲葉病毒的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210000614.0
• 申請(qǐng)日: 2012-01-04
• 公開（公告）號(hào): CN102426234A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喬寧;李美芹;竺曉平;劉永光;王興翠;國(guó)家進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濰坊科技學(xué)院;山東農(nóng)業(yè)大學(xué);山東省蔬菜工程技術(shù)研究中心
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N21/31
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 李桂存

技術(shù)領(lǐng)域????

本發(fā)明涉及基因工程中病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種快速準(zhǔn)確檢測(cè)番茄黃化曲葉病毒的方法。

背景技術(shù)???

番茄是我國(guó)主要的蔬菜品種之一，在全國(guó)各蔬菜產(chǎn)區(qū)均有大面積的種植，而且在蔬菜周年供應(yīng)中占有非常重要的地位。隨著溫室大棚蔬菜種植技術(shù)的推廣以及蔬菜反季節(jié)栽培經(jīng)濟(jì)效益的提高，溫室番茄栽培面積連年增長(zhǎng)。與此同時(shí)，其病害的發(fā)生也呈現(xiàn)逐步加重的趨勢(shì)：番茄花葉病毒病(Tomato?mosaic?virus，TMV)和黃瓜花葉病毒病(Cucumber?mosaic?virus，CMV)一直是番茄生產(chǎn)中的主要病毒病，但近年來，在番茄主產(chǎn)區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)了一種新的病毒病--番茄黃化曲葉病毒病。

番茄黃化曲葉病毒(Tomato?Yellow?Leaf?Curl?Virus,TYLCV)屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)，主要通過煙粉虱(Bemisia?tabaci)?傳播,?可以侵染茄科、豆科等多種植物，是分布廣泛的世界性番茄病毒之一。由TYLCV引起的番茄黃化曲葉病毒病是一種毀滅性病害，自1964年發(fā)現(xiàn)以來，已給許多國(guó)家和地區(qū)造成了嚴(yán)重危害。低密度煙粉虱就可以導(dǎo)致病毒擴(kuò)散與流行，且可以終生傳毒。番茄在開花前感染黃化曲葉病毒病造成的減產(chǎn)幅度很大，一般減產(chǎn)在80%以上，嚴(yán)重的甚至絕收，坐果后染病會(huì)有一定的產(chǎn)量，但果實(shí)品質(zhì)很差。番茄植株感染病毒后，初期主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)點(diǎn)葉片葉緣先變黃色，后整個(gè)葉片黃化，生長(zhǎng)遲緩甚至停滯生長(zhǎng)，莖節(jié)間明顯變短，植株矮化現(xiàn)象明顯，葉片變小變厚、有褶皺、葉緣向上卷曲，葉質(zhì)脆硬，這些癥狀主要表現(xiàn)在植株上部葉片上，下部老葉癥狀不明顯；如果在苗期染病則植株嚴(yán)重矮化，無法正常開花結(jié)果；在生長(zhǎng)發(fā)育后期染病植株僅上部葉片和新芽表現(xiàn)癥狀，但坐果數(shù)量明顯減少，果實(shí)膨大速度慢、果實(shí)小，成熟期果實(shí)著色不均勻是該病在果實(shí)上的表現(xiàn)癥狀，果實(shí)產(chǎn)量和商品價(jià)值均大幅度下降，經(jīng)濟(jì)效益受到嚴(yán)重?fù)p失。此病一旦發(fā)生，除了砍掉染病的植株，尚未尋找到有效診治和防止病害擴(kuò)散的方法，而且將會(huì)給當(dāng)?shù)氐姆焉a(chǎn)帶來巨大的損失，因此能否有效及時(shí)地診斷番茄病害已成為制約番茄高產(chǎn)的關(guān)鍵因素。

番茄黃化曲葉病毒病在全世界廣泛分布，目前至少有39個(gè)國(guó)家的棉花、木薯和番茄等作物正在遭受此病毒的毀滅性危害，因而成為各國(guó)學(xué)者的研究熱點(diǎn)。近年來，番茄黃化曲葉病毒病在我國(guó)的上海、廣西、陜西、云南、江蘇、浙江、重慶、廣東等地廣泛發(fā)生，并對(duì)上述地區(qū)的番茄生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，而且有向北方擴(kuò)展的可能性和趨勢(shì)。2007年10月河南開封市開封縣1000多畝溫室番茄普遍發(fā)生病毒病，癥狀和番茄黃化曲葉病毒病相同，毀種面積大約占五分之一，勉強(qiáng)沒有毀種的大棚預(yù)計(jì)減產(chǎn)都在30%；2007年11月山東濟(jì)寧報(bào)告溫室番茄發(fā)生疑似的番茄黃化曲葉病毒病，另外，自2005年以來在山東濰坊、菏澤及壽光等部分地區(qū)也發(fā)現(xiàn)類似的病毒病癥狀?？梢妼?duì)于保護(hù)地番茄種植地區(qū)來說，建立長(zhǎng)期有效的番茄病毒檢測(cè)體系，完善檢測(cè)技術(shù)已是迫在眉睫，要嚴(yán)防該病發(fā)生，如若控制不當(dāng)，將造成災(zāi)難性的后果。

TYLCV的早期診斷主要依賴于感病作物的癥狀，但癥狀往往隨著土壤、生長(zhǎng)條件和氣候的變化而出現(xiàn)差異；加之基層農(nóng)技人員對(duì)該番茄病害的癥狀了解得不夠清楚，易于與其他番茄病害產(chǎn)生混淆，從而誤診誤治，延誤病情，甚至造成病害的大面積傳播。因此，尋找一種大眾型、經(jīng)濟(jì)型、實(shí)用型、快捷型的檢測(cè)方法顯得尤為重要。

目前，植物病毒檢測(cè)的主要方法是以PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測(cè)法和以ELISA為代表的免疫學(xué)檢測(cè)法。雖然PCR法是業(yè)界公認(rèn)的準(zhǔn)確性比較高的檢測(cè)方法，但該法專業(yè)性強(qiáng)、技術(shù)含量高，檢測(cè)試劑昂貴，而且還需要PCR儀等貴重儀器，造成檢測(cè)成本居高不下，因此，只能局限在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行專業(yè)檢測(cè)，難以作為一種常規(guī)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行推廣應(yīng)用。