[發(fā)明專利]通過降低腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體2mRNA的表達(dá)治療乳腺癌的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201180067534.0
• 申請(qǐng)日: 2011-10-20
• 公開（公告）號(hào): CN103379914A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金哲右;張支映
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 比奧恩夫拉公司
• 主分類號(hào): A61K38/16
• 分類號(hào): A61K38/16;C12N15/113;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭;郝傳鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及通過降低腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體2mRNA的表達(dá)治療乳腺癌的方法。更加具體而言，本發(fā)明涉及通過ANT2siRNA（小干擾RNA）或ANT2shRNA（短發(fā)夾RNA）治療乳腺癌的方法。

背景技術(shù)

腫瘤是由異常的、不受控制的且失調(diào)的細(xì)胞增殖（包括過度的異常細(xì)胞增殖）引起的。當(dāng)腫瘤表現(xiàn)出破壞性增殖、滲透和轉(zhuǎn)移時(shí)，將該腫瘤劃分為惡性腫瘤。具體而言，從分子生物學(xué)的角度來說，腫瘤被認(rèn)為是由基因突變引起的遺傳性疾病。為了治療惡性腫瘤，已單獨(dú)實(shí)施或聯(lián)合實(shí)施外科手術(shù)、放療和化療這三種治療方法。具體而言，外科手術(shù)為一種根除大部分致病組織的方法，因此該方法非常有效地除去正在乳房、結(jié)腸和皮膚中生長的腫瘤，但是該方法無法同樣有效地治療脊椎中的腫瘤和彌散性腫瘤。

放療已被用于治療急性炎性腫瘤、良性或惡性腫瘤、內(nèi)分泌失調(diào)和過敏癥，并且放療有效治療這些由異常的快速細(xì)胞分裂引起的惡性腫瘤。然而，放療帶來嚴(yán)重的副作用，例如，功能失調(diào)或正常細(xì)胞缺損，在治療區(qū)域上爆發(fā)皮膚疾病，尤其在兒童中引起發(fā)育遲緩和骨發(fā)育不全。

化療為阻礙癌細(xì)胞復(fù)制或代謝的方法，該方法已被用于治療乳腺癌、肺癌和睪丸癌。這種治療方法的最大的問題在于全身化療所帶來的副作用。這種化療的副作用是致命的，由此增加了對(duì)該治療的焦慮和恐懼。化療的代表性的副作用之一為劑量限制毒性（DLT）。粘膜炎為各種抗癌藥劑（抗代謝劑（例如，5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤）和抗腫瘤抗生素（例如，阿霉素））的DLT實(shí)例之一。大多數(shù)副作用病例需要住院治療或至少需要止痛藥。因此，化療和放療帶來的副作用是癌癥患者的治療中的重要問題。

同時(shí)，基因療法是以DNA重組技術(shù)為基礎(chǔ)的，該基因療法為將治療性基因插入癌癥患者細(xì)胞以校正基因缺損或向失調(diào)細(xì)胞賦予新的功能以治療或預(yù)防由突變疾病、基因感染、疾病、癌癥、自體免疫性心血管疾病等引起的各種遺傳性疾病的方法。更加具體而言，基因療法為通過將治療性基因運(yùn)送至靶器官中，誘導(dǎo)正常蛋白或治療性靶蛋白的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)治療所述疾病的方法。基因療法相對(duì)于使用藥物的其他療法而言具有非常好的選擇性，并且可長期使用，對(duì)疑難疾病具有改善的治療效果。為了提高基因療法的療效，基因轉(zhuǎn)移技術(shù)對(duì)于在靶細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效基因表達(dá)而言是必不可少的。

基因載體為將治療性基因插入靶細(xì)胞中的媒介。優(yōu)選的基因載體為對(duì)人體無害，可大量生產(chǎn)并能夠有效傳遞治療性基因且誘導(dǎo)治療性基因穩(wěn)定表達(dá)的一種基因載體。因此，基因轉(zhuǎn)移技術(shù)為基因療法中的關(guān)鍵因素并且迄今為止，基因療法中最需要的代表性的基因載體以病毒載體（例如，腺病毒、腺相關(guān)病毒（AVV）以及逆轉(zhuǎn)錄病毒）和非病毒載體（例如，脂質(zhì)體和聚乙烯亞胺）為例。

基因療法的治療方案中的一種為通過使用腫瘤抑制基因、腫瘤特異性殺傷病毒、自殺基因和免疫調(diào)節(jié)基因控制腫瘤細(xì)胞。具體而言，使用腫瘤抑制基因的方法為通過運(yùn)送腫瘤抑制基因的原始形式（例如，p53，其在許多癌癥患者體內(nèi)為缺失的或突變的）治療癌癥。使用腫瘤特異性殺傷病毒的方法為通過利用轉(zhuǎn)化到癌組織中的腫瘤抑制基因的活性，將病毒基因載體運(yùn)送進(jìn)入癌癥患者體內(nèi)治療癌癥，所述病毒基因載體可在腫瘤細(xì)胞中選擇性增殖。上述兩種方法的基本治療方案為直接殺死腫瘤細(xì)胞。同時(shí)，使用自殺基因的方法為通過插入諸如HSK-TK之類的敏感性基因誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自殺。使用免疫調(diào)節(jié)基因的方法為通過遞送增加抗腫瘤免疫反應(yīng)的基因（例如，白介素12（IL12）、白介素4（IL4）、白介素7（IL7）、γ-干擾素和腫瘤壞死因子（TNF））刺激T-細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞識(shí)別或通過干擾誘導(dǎo)腫瘤的蛋白質(zhì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡間接治療疾病。

對(duì)于為了治療癌癥而進(jìn)行的各種嘗試中的基因療法而言，本發(fā)明的發(fā)明人選擇ANT2（腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體2）作為靶基因以研發(fā)有效且安全的抗癌藥劑。

ANT（腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體）為在線粒體內(nèi)膜（IM）中發(fā)現(xiàn)的酶，其通過線粒體外膜（OM）的VDAC（電壓依賴性陰離子通道）輸入來自細(xì)胞質(zhì)的ADP并將電子傳遞鏈系統(tǒng)中產(chǎn)生的ATP輸出至細(xì)胞質(zhì)中（HLA?Vieira等人,Cell?Death?and?Differentiation,7,1146-1154,2000）。

本領(lǐng)域還已知在細(xì)胞的能量代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用的ANT被分為ANT1、ANT2和ANT3。具體而言，ANT2在正常細(xì)胞中表現(xiàn)出低表達(dá)速率但在癌細(xì)胞或類似高度增殖的細(xì)胞中高表達(dá)，這看起來與厭氧條件下的糖酵解密切相關(guān)，這樣，ANT2開始作為癌癥治療中的新靶標(biāo)（Chevrollier,A等人，Med.Sci.,21(2),156-161,2005）。

發(fā)明內(nèi)容