[發明專利]重組酵母和使用該重組酵母的物質生產方法

有效

• 申請號: 201180065501.2
• 申請日: 2011-01-20
• 公開（公告）號: CN103328631B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 村松正善;伊藤正和
• 申請（專利權）人: 豐田自動車株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/19;C12P7/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所11247
• 代理人: 曽禎,段承恩

技術領域

本發明涉及以抑制和/或強化的方式改變規定基因的表達，還涉及導入了規定基因的重組酵母、以及使用該重組酵母的物質生產方法。

背景技術

作為與使用酵母的物質生產相關的技術，主要可列舉設計以乙酰輔酶A為中間體的物質生產途徑的方法。例如，作為代表性脂肪酸的油酸，需要以9分子的乙酰輔酶A為原料，作為代表性二萜的胡蘿卜素，需要以12分子的乙酰輔酶A為原料。這樣，已知利用酵母內所蓄積的乙酰輔酶A來合成作為藥品和/或精細化學品有用的脂肪酸的技術(專利文獻1)、合成萜類的技術(專利文獻2)、合成聚酮類化合物的技術(專利文獻3)。另外，作為以乙酰輔酶A為中間體合成的物質，可列舉作為生物燃料收到關注的丁醇(專利文獻4)、異丙醇(專利文獻5)和法呢烷(專利文獻5)。

但是，在酵母中，乙酰輔酶A是在菌體外生產的乙醇被攝入體內，由所攝入的乙醇合成的。如果由酵母生產的乙醇變為高濃度，則酵母自身的生長被抑制。因此，通過提高酵母的乙醇生產能力，或者提高酵母的乙醇攝入量這樣的方法來提高菌體內的乙酰輔酶A量是困難的。

更具體地，專利文獻2公開了由乙酰輔酶A合成法呢烷的技術，但其收率為理論收率的25％左右。另外，專利文獻6公開了由乙酰輔酶A合成6-甲基水楊酸的技術，但其收率為理論收率的20％左右。這樣，在由乙酰輔酶A的物質生產中，存在生產性顯著低這樣的問題。

現有專利文獻

專利文獻1：日本特開昭63-287491號公報

專利文獻2：WO2008/045555

專利文獻3：日本特開2008-22865

專利文獻4：WO2008/137406

專利文獻5：US2008/0293125

專利文獻6：US2006/0148052

發明內容

發明要解決的課題

于是，本發明鑒于上述事實，目的在于特別通過在酵母中導入由葡萄糖6磷酸合成乙酰輔酶A或乙酸的代謝途徑，從而提供物質生產性優異的重組酵母和使用該酵母的物質生產方法。

用于解決課題的方法

為了實現上述目的，本發明者們進行了深入研究，結果發現，通過對酵母在削弱參與糖酵解系統的基因的同時導入磷酸轉酮醇酶基因，從而乙酸、乙酰輔酶A和來自乙酰輔酶A的物質的生產性提高，從而完成了本發明。此外，磷酸轉酮醇酶是催化將木酮糖5-磷酸轉換成乙酰磷酸和甘油醛3-磷酸的反應的酶。

即，本發明包含以下(1)～(7)。

(1)重組酵母，其中，削弱了磷酸果糖激酶基因，且導入了磷酸轉酮醇酶基因。

(2)根據(1)所述的重組酵母，其特征在于，強化了葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因和/或D-核酮糖-5-磷酸-3-差向異構酶基因的表達。

(3)根據(1)所述的重組酵母，其特征在于，導入了磷酸轉乙酰酶基因，和/或強化了乙酰輔酶A合成酶基因的表達。

(4)根據(1)所述的重組酵母，其特征在于，強化了參與以乙酰輔酶A為底物合成乙酸乙酯的反應的醇乙酰轉移酶基因的表達。

(5)根據(1)所述的重組酵母，其特征在于，導入了參與以乙酰輔酶A為底物合成異丙醇的反應的乙酰乙酸脫羧酶基因、丁酸-乙酰乙酸輔酶A轉移酶的亞基A基因、丁酸-乙酰乙酸輔酶A轉移酶的亞基B基因、乙酰輔酶A乙酰轉移酶基因和異丙醇脫氫酶基因。

(6)物質的制造方法，包括將上述(1)～(5)的任一項所述的重組酵母用培養基進行培養的工序。

(7)根據(6)所述的物質的制造方法，其特征在于，上述物質是選自由乙酸、乙酰輔酶A、來自乙酰輔酶A的乙酸乙酯和來自乙酰輔酶A的異丙醇組成的組中的1種。

發明的效果