[發明專利]活性蛋白酶抗性抗體Fc突變體

有效

• 申請號: 201180061808.5
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN103260640A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: W.斯特羅爾;R.喬丹;R.布雷滋基
• 申請（專利權）人: 詹森生物科技公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 孔青;李進

優先權申請

本申請要求于2010年12月23日提交的美國申請序列號61/426,619和于2011年9月29日提交的美國申請序列號61/540,882的優先權，所述美國申請以引用的方式整體并入本文。

技術領域

本發明涉及人抗體IgG恒定區，尤其是Fc區，所述恒定區如此突變以便改變蛋白水解切割位點，賦予對內源和病原體衍生的蛋白酶的抗性，并且進一步改變為特異性結合Fcγ受體并通過Fc受體介導的補體級聯交聯或活化來活化通過免疫細胞的促有絲分裂應答。新型序列可摻入其中期望蛋白水解抗性和細胞毒效應功能性的治療抗體組合物中。

背景技術

人抗體的IgG同種型由亞型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4組成，所述亞型各含有通過鉸鏈區連接至單個Fc結構域的兩個抗原結合臂(Fabs)。IgG1，治療單克隆抗體中代表的占優勢亞類，被視為在循環中具有17.6-56.2天的長半衰期的穩定分子。(Salfeld，Nat?Biotechnol《自然·生物技術》25(12)：1369-72，2007)。然而，IgG1對通過許多生理學相關的蛋白酶在鉸鏈區中的蛋白水解敏感，所述蛋白酶與侵襲性癌癥(例如基質金屬蛋白酶)和病理微生物相關。在重鏈之間的二硫鍵(核心鉸鏈)上的切割釋放單價Fab，并且在二硫鍵下的雙向切割釋放二價結構，F(ab′)₂片段。幾種金屬蛋白酶和兩種細菌酶，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus)的谷氨酰基內肽酶V8(GluV8)和化膿性鏈球菌(Streptococcus?pyogenes)的免疫球蛋白降解酶(IdeS)，作用于下鉸鏈(二硫鍵下(圖1)中的IgG1，并且最終產生F(ab′)₂和Fc片段(Ryan等人，Mol?Immunol《分子免疫學》45(7)：1837-462008)。

當針對細胞表面抗原的治療單克隆抗體(mAbs)的功效與靶細胞的消除相關時，通過Fc結構域賦予的抗體“效應子功能”確實受牽涉并且在抗體的總體療效中是重要的。(Bibeau等人，J?Clin?Oncol《臨床腫瘤學雜志》27：1122-11292009；Cartron等人，Blood《血液》99：754-7582002；和Musolino等人，J?Clin?Oncol《臨床腫瘤學雜志》26：1789-17962008)。與免疫細胞上表達的Fcγ受體(FcγR)相互作用的抗體的Fc結構域，以及與補體相互作用的Fc結構域被認為促成針對細胞表面抗原的幾種單克隆抗體(mAbs)的作用。這些相互作用可通過抗體依賴細胞的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)和補體依賴性細胞毒性(CDC)導致mAb靶向細胞的消除。

近來，已顯示IgG1的重鏈多肽之一中的單次蛋白水解切割不破壞鏈的結合，并且因此維持循環抗原結合能力中的壽命；但引起IgG1結合FcγRs的能力的喪失并驅動Fc-介導的效應子功能(Brezski等人，Proc?Natl?AcadSci?USA《美國國家科學院院刊》106：17864-178692009)。治療單克隆抗體的單次和多次切割可導致結合靶但已喪失一些或全部功效的種類。因此，在其中期望靶細胞或組織的破壞的其它用途中，改造蛋白酶抗性但效應子功能增強的Fc-平臺可提供用于改善抗癌和抗傳染病治療的顯著優點。

發明內容

本發明提供在抗體或抗體樣治療劑的改造中有用的修飾的免疫球蛋白恒定結構域的組合物。包含Fc區和靶向細胞表面配體的用作治療劑的IgG種類的免疫球蛋白是用于使用本發明的組合物修飾的具體候選物。本發明的修飾的免疫球蛋白對通過IgG的抗原結合結構域靶向的環境中的蛋白水解酶是抗性的，但保留與抗體的Fc區相關的重要效應子功能，所述環境例如包含癌細胞或腫瘤脈管系統相關抗原的瘤內環境。

根據本發明，提供通過在IgG1?Fc區中摻入賦予蛋白酶抗性的突變來生成蛋白酶抗性IgG1單克隆抗體的方法。在進一步方面，通過在Fc區中的遠端位置上引入另外的氨基酸變化，可恢復含有此類突變的IgGs的功能活性。