[發明專利]擴增造血干細胞

有效

• 申請號: 201180056428.2
• 申請日: 2011-11-23
• 公開（公告）號: CN103415615A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 高紅;朱正侖
• 申請（專利權）人: 高紅;朱正侖
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N15/113;G01N33/53
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 吳小明

相關申請

本申請要求2010年11月24日提交的美國臨時申請61/417，193的優先權。將該優先權申請全部內容并入本文作為參考。

發明背景

血細胞生成(hematopiesis)包括造血干細胞(HSC)的增殖和它們向祖細胞(例如紅系祖細胞(erythroprogenitor?cell))的分化。HSC產生血液和免疫系統的所有譜系的成熟細胞。

在數十年間，多個譜系特異性轉錄因子，如GATA-1和EKLF已經顯示在血細胞生成/紅細胞生成中具有重要作用。然而，尚未完全了解允許擴展血細胞生成和紅細胞生成的細胞-內在的因子。已經顯示一些細胞-內在的因子(如WNT3a，β-聯蛋白和HOXB4)的過表達導致HSC在小鼠中的顯著擴增。然而，它們對人HSC的擴增的效果有限。

離體(ex?vivo)擴增人HSC的困難成為基于人HSC的治療應用，例如造血系統的重建中的主要挑戰。存在開發有效擴增人HSC的方法的需要。

發明概述

本發明基于VentX的下調導致人HSC的離體擴增的出人意料的結果，所述人HSC是CD34+，在體外(in?vitro)和體內(in?vivo)都是如此。

本發明的一個方面涉及擴增HSC的方法。所述方法包括兩個步驟：(1)從受試者(例如人和非人哺乳動物)分離HSC，和(2)使HSC與抑制VentX多肽的表達或活性的試劑接觸，由此增加HSC的擴增。分離步驟可以通過從所述受試者獲得包含HSC的生物樣品(例如，骨髓、外周血和臍帶血)并且從所述生物樣品中收集HSC來進行。

在一個實例中，試劑是免疫抑制劑，例如依木蘭(Imuran)、甲氨蝶呤(methotrexate)、潑尼松(prednisone)或驍悉(Cellcept)。所述試劑也可以是干擾RNA(iRNA)試劑、反義寡核苷酸、核酶或抗體。

所述iRNA試劑具有第一鏈，所述第一鏈具有與編碼VentX蛋白的基因的區域同源的第一核苷酸序列。所述iRNA試劑靶向從該基因轉錄的mRNA，包括其5’非翻譯區。

第一核苷酸序列可以是RNA形式，例如

UUCAGAAUCGCCGCAUGAAACACAAACGG(SEQ?ID?NO：5)，

UCUACUCAACGUCUUCUGGCCUUGCCAAU(SEQ?ID?NO：6)，

CAAAUCUGCCUGCGCCGGAGAGGACCAUG(SEQ?ID?NO：7)，

GGUUGAGUAAGGAGCCAAAUACCUUGCGG(SEQ?ID?NO：8)，

CGGGUUGAGUAAGGAGCCAAAUA(SEQ?ID?NO：9)，

CCGCAUGAAACACAAACGGCAAA(SEQ?ID?NO：10)，

CCCCAGCUUUCUACUCAACGUCU(SEQ?ID?NO：11)，

GGGUUGAGUAAGGAGCCAA(SEQ?ID?NO：29)，

GGUUGAGUAAGGAGCCAAA(SEQ?ID?NO：30)，

GCUCUCAGAGGUCCAGAUA(SEQ?ID?NO：31)，

GGUUUCAGAAUCGCCGCAU(SEQ?ID?NO：32)，

UCAGAAUCGCCGCAUGAAA(SEQ?ID?NO：33)，

UCGCCGCAUGAAACACAAA(SEQ?ID?NO：34)，

GCCGCAUGAAACACAAACG(SEQ?ID?NO：35)，

GCAUGAAACACAAACGGCA(SEQ?ID?NO：36)，

GCUUUCUACUCAACGUCUU(SEQ?ID?NO：37)，

UCUCUGCCAAGUGGCACAA(SEQ?ID?NO：38)，

GGACUCAGUUGUUCUGUUU(SEQ?ID?NO：39)，

CCCGGCCCUGAGAAUAUAU(SEQ?ID?NO：40)，

CCGGCCCUGAGAAUAUAUU(SEQ?ID?NO：41)，

GGUCAGUGAACAGAGUCAA(SEQ?ID?NO：42)，

GCAGAAGUGGGCUUGUCAU(SEQ?ID?NO：43)，

GCAGGUGUGUUUAUAGCGU(SEQ?ID?NO：44)，