[發(fā)明專利]用于向神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞導(dǎo)入基因的腺相關(guān)病毒粒子

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201180052044.3
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN103189507A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 村松慎一
• 申請（專利權(quán)）人: 學(xué)校法人自治醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A61K35/76;A61K48/00;C12N7/00
• 代理公司: 隆天國際知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 張永康;向勇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于導(dǎo)入基因的重組腺相關(guān)病毒（rAAV）粒子。更具體而言，本發(fā)明涉及用于高效率地向神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞導(dǎo)入目的基因的能夠通過血腦屏障的重組腺相關(guān)病毒（rAAV）粒子、以及含有該病毒粒子的組合物等。

背景技術(shù)

中樞神經(jīng)障礙給公共衛(wèi)生方面帶來了大的問題。據(jù)推測，即使僅僅由神經(jīng)細(xì)胞的變性脫落導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙的阿爾茨海默病（Alzheimer），在日本國內(nèi)也有60萬人以上的患者。現(xiàn)在，很多中樞神經(jīng)障礙是采用治療藥進(jìn)行全身給藥來治療。但是，當(dāng)全身給藥時，很多情況下藥物無法通過血腦屏障，往往是低效率的，很多有潛力的有用的治療用蛋白質(zhì)等不能予以全身給藥。

利用腺相關(guān)病毒（AAV）作為基因治療用的病毒來源的載體的方法是公知的（例如，WO2003/018821、WO2003/053476、WO2007/001010等）。但是，當(dāng)試圖將基因?qū)肽X等神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞時，有必要研究上述血腦屏障等的防御機(jī)能、神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的導(dǎo)入效率、表達(dá)效率、更安全的給藥方法等的問題。

Nakai?H等（Unrestricted?hepatocyte?transduction?with?adeno-associated?virus?serotype8vectors?in?mice.J.Virol.2005Jan；79（1）：214-24.）中記載了，將基因?qū)敫渭?xì)胞作為目的，使用了通過EF1α啟動子對LacZ基因的標(biāo)記進(jìn)行表達(dá)的8型AAV載體AAV8-EF1α（-nlslacZ）的例子。

Foust?KD等（Intravascular?AAV9preferentially?targets?neonatal?neurons?and?adult?astrocytes.Nat.Biotechnol.2009Jan；27（1）：59-65.）中記載了關(guān)于具有9型AAV（AAV9）的外殼蛋白，通過雞β-肌動蛋白雜合啟動子（chicken?β-actin?hybrid?promoter）（CB）來表達(dá)熒光蛋白GFP的自補(bǔ)（self-complementary（sc））型載體。另外，Duque?S等（Intravenous?Administration?of?Self-complementary?AAV9Enables?Transgene?Delivery?to?Adult?Motor?Neurons.Mol.Ther.2009Jul；17（7）：1187-96.）（結(jié)果的概要參照表1）中公開了具有9型AAV（AAV9）的衣殼蛋白、并且在巨細(xì)胞病毒（CMV）立即早期啟動子（cytomegalovirus?immediate?early?promoter）的控制下表達(dá)熒光蛋白GFP的自補(bǔ)型載體（scAAV9-GFP）。

雖然通過這些重組AAV9載體的血管內(nèi)給藥將基因?qū)肓四X（新生兒的神經(jīng)元、成人的星形膠質(zhì)細(xì)胞等），但由于需要含有使病毒基因組成為sc型的逆向序列的緣故，該基因組中可整合的基因成為非sc型時一半的長度。具體而言，在sc型載體中可整合的基因，被限制為含啟動子和poly（A）區(qū)域的2kb短的基因。基于該限制，重組病毒載體的治療用途也受到限制。

如上所述，雖然以往制作了各種重組腺相關(guān)病毒載體，但是目前尚未發(fā)現(xiàn)能夠采用簡易的給藥方法通過生物體的血腦屏障、特別是將基因有效地導(dǎo)入腦神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞并且能夠利用有望更廣泛的治療用途的非sc型AAV基因組的重組AAV載體。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：Nakai?H等（J.Virol.2005Jan；79（1）：214-24.）

非專利文獻(xiàn)2：Foust?KD等（Nat.Biotechnol.2009Jan；27（1）：59-65.）

非專利文獻(xiàn)3：Duque?S等（Mol.Ther.2009Jul；17（7）：1187-96.）

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明要解決的課題

如上所述的狀況中，希望開發(fā)一種病毒載體（病毒粒子）且該病毒載體能夠通過采用高效率且更簡易的給藥方法將目的治療用基因送入到生物體的腦、脊髄等內(nèi)存在的神經(jīng)細(xì)胞、特別是腦神經(jīng)細(xì)胞中，由于能夠更廣泛地選擇目的基因的長度，從而能夠包裝非sc型病毒基因組。

解決課題的方法