[發(fā)明專利]用于向神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞導(dǎo)入基因的腺相關(guān)病毒粒子

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201180052044.3
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN103189507A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 村松慎一
• 申請（專利權(quán)）人: 學(xué)校法人自治醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A61K35/76;A61K48/00;C12N7/00
• 代理公司: 隆天國際知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 張永康;向勇

1.一種重組腺相關(guān)病毒粒子，其包括：

（a）殼粒，該殼粒含有能夠形成病毒粒子的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)含有在相對于序列號2、4或6的氨基酸序列具有90%以上的同一性的氨基酸序列中至少一個(gè)表面露出的酪氨酸殘基被置換為其它氨基酸殘基的氨基酸序列；以及

（b）多核苷酸，該多核苷酸被包裝于該殼粒內(nèi)，并且該多核苷酸含有神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞特異性啟動子序列和以能夠操作的方式連結(jié)于該啟動子序列的核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的病毒粒子，其中，所述蛋白質(zhì)含有至少序列號2中的445位的酪氨酸殘基、序列號4中的444位的酪氨酸殘基、或者序列號6中的446位的酪氨酸殘基被置換了的氨基酸序列。

3.如權(quán)利要求1或2所述的病毒粒子，其中，所述酪氨酸殘基被置換為苯丙氨酸殘基。

4.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，所述蛋白質(zhì)含有序列號8、10或12的氨基酸序列、或者在序列號8、10或12的氨基酸序列的444～446位以外的位置中具有一個(gè)至數(shù)個(gè)氨基酸的缺失、置換、插入和/或添加的氨基酸序列，并且能夠形成病毒粒子。

5.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，在所述多核苷酸的5'末端和3'末端，分別含有來自AAV1、AAV2、AAV3或者AAV4的5'末端和3'末端的倒轉(zhuǎn)末端重復(fù)ITR序列。

6.如權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，在所述多核苷酸的5'末端和3'末端，分別含有序列號13和序列號14的核苷酸序列。

7.如權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，所述多核苷酸具有總長約2～6kb的長度，并且是正義鏈或者反義鏈的單鏈DNA。

8.如權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，所述啟動子序列選自于由下列啟動子序列所構(gòu)成的組中：突觸蛋白I啟動子序列；髓鞘堿性蛋白啟動子序列；神經(jīng)元特異性烯醇化酶啟動子序列；鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II啟動子、即CMKII啟動子；微管蛋白αI啟動子；血小板來源生長因子β鏈啟動子；膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP啟動子序列；L7啟動子序列、即小腦浦肯野細(xì)胞特異性啟動子；以及谷氨酸受體δ2啟動子、即小腦浦肯野細(xì)胞特異性啟動子。

9.如權(quán)利要求7所述的病毒粒子，其中，所述啟動子序列含有序列號23或者序列號24所述的多核苷酸。

10.如權(quán)利要求7所述的病毒粒子，其中，以能夠操作的方式連結(jié)于所述啟動子序列的核苷酸序列，編碼選自于由抗體、神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF、生長因子HGF、酸性成纖維細(xì)胞生長因子aFGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子bFGF、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF、芳香族氨基酸脫羧酶AADC以及β淀粉樣蛋白分解酶的腦啡肽酶所構(gòu)成的組中的蛋白質(zhì)。

11.如權(quán)利要求7所述的病毒粒子，其中，以能夠操作的方式連結(jié)于所述啟動子序列的核苷酸序列，表達(dá)了相對于芳香族氨基酸脫羧酶AADC或者α-突觸核蛋白的dsRNA、siRNA、shRNA、或者miRNA。

12.如權(quán)利要求9所述的病毒粒子，其中，所述抗體是對凝集性β淀粉樣蛋白的抗體。

13.如權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，該病毒粒子能夠通過被檢體的血腦屏障。

14.如權(quán)利要求1～13中任一項(xiàng)所述的病毒粒子，其中，所述病毒粒子是腺相關(guān)病毒載體。

15.一種醫(yī)藥組合物，其中，其含有權(quán)利要求1～14中任一項(xiàng)所述的病毒粒子。