[發明專利]用于在細胞培養物中生產病毒的過程中除去外來因子的方法

在審

• 申請號: 201180043396.2
• 申請日: 2011-07-06
• 公開（公告）號: CN103080304A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: F.M.I.科利格農;I.S.L.克諾特;J-P.J.J.馬泰塞
• 申請（專利權）人: 葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀

技術領域

本發明涉及改進的用于生產病毒、特別是用于藥物（例如疫苗接種或基因治療）中的病毒的方法。

背景技術

新近開發的用于生產包含病毒的藥物(例如免疫原性的組合物或疫苗)的方法之一依賴于細胞培養物系統，特別是哺乳動物細胞培養物。通常，那些系統包括：用目標病毒感染細胞，并在細胞中復制和生產病毒足夠的時間以后，從該細胞純化病毒。在細胞上生產病毒的同時，可以在不同的生產階段給該病毒添加其它原料(例如組織培養試劑、穩定劑)。因而，外來因子能潛在的通過這些成分中的任一種進入病毒產物中，并污染所述產物。在細胞底物上生產的病毒特別易于發生這類污染。已知外來因子（其中大部分是病毒）會污染生物材料例如細胞系。

發明內容

在第一方面，本發明提供了用于在細胞培養物中生產目標病毒的方法，該方法包括：使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸，其中該細胞該對該目標病毒的感染是易感的，其特征在于，包含目標病毒的溶液和易感細胞之間的接觸時間少于或等于120分鐘。

在第二方面，本發明提供了用于生產目標病毒的方法，該方法包括下述步驟：

a)?????????使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞對該目標病毒的感染是易感的，

b)???????????????????從該細胞除去包含目標病毒的溶液，和

c)???????????????????在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。

在第三方面，本發明提供了用于生產目標病毒的方法，該目標病毒用于藥物中，該方法包括下述步驟：

a)???????????????????使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞該對該目標病毒的感染是易感的，

b)???????????????????從該細胞除去包含目標病毒的溶液，

c)???????????????????在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，和任選地

d)???????????????????用合適的藥用載體配制生產的病毒。

在第四方面，本發明提供了用于生產目標病毒的方法，該方法包括下述步驟：

a)??????????????使細胞群體接觸包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液，其中該細胞對該目標病毒的感染是易感的，并且該接觸時間段足以允許該目標病毒感染細胞群體的至少一個亞群，

b)??????????????從該細胞除去該包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液，

c)???????????????在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，其中在復制的目標病毒群體中的至少一種外來因子的DNA含量水平與在包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液中存在的水平相比下降了至少90%。

在第五方面，本發明提供了用于在目標病毒復制過程中除去和/或減少外來因子發生率的方法，該方法包括下述步驟：

i)??給易感細胞接種病毒接種物，該病毒接種物包含目標病毒和一種或多種外來因子，

ii)??????????????培養接種的細胞，和

iii)???????????在接種以后小于120分鐘后，洗滌所述接種的細胞培養物。

在另一個方面，本發明提供了用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟：

a)???????????????????使細胞群體接觸包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞易于被目標病毒感染，

b)???????????????????從該細胞除去包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液，

c)???????????????????在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。

在另一個方面，本發明提供了一種用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟：