[發明專利]改進的抗-血清白蛋白結合變體

無效

• 申請號: 201180035166.1
• 申請日: 2011-05-20
• 公開（公告）號: CN103003303A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: E.德安格利斯;C.埃納弗;H.劉;O.肖恩;M.普佩卡-斯維德
• 申請（專利權）人: 葛蘭素集團有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;A61K47/48;C07K14/56;C07K14/575;C07K16/28;A61K31/00;A61K38/21;A61K38/26
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 劉健;權陸軍

本發明涉及抗-血清白蛋白免疫球蛋白單一可變結構域DOM7h-11的改進的變體，以及包含這種變體的配體和藥物綴合物、組合物、核酸、載體和宿主。

發明背景

WO04003019和WO2008/096158公開了具有治療有用的半衰期的抗-血清白蛋白(SA)結合部分，如抗-SA免疫球蛋白單一可變結構域(dAbs)。這些文獻公開了單體抗-SA?dAbs以及包含這種dAbs的多特異性配體，例如，包括抗-SA?dAb和特異性結合目標抗原如TNFR1的dAb的配體。公開了特異性結合來自多于一個物種的血清白蛋白的結合部分，例如人/小鼠交叉反應的抗-SA?dAbs。

WO05118642和WO2006/059106公開了為了增加藥物的半衰期而將抗-SA結合部分，如抗-SA免疫球蛋白單一可變結構域，綴合或結合至藥物的概念。其公開并例舉了蛋白、肽和新的化學實體(NCE)藥物。WO2006/059106公開了使用這種概念以增加促胰島素釋放試劑(insulintropic?agents)，例如，腸降血糖素激素如胰高血糖素樣肽(GLP)-1的半衰期。還可參考Holt等,?“Anti-Serum?albumin?domain?antibodies?for?extending?the?half-lives?of?short?lived?drugs”,?Protein?Engineering,?Design?&?Selection,?vol?21,?no?5,?pp283-288,?2008。WO2008/096158公開了一種很好的抗-SA?dAb，DOM7h-11。期望提供作為DOM7h-11的變體并特異性結合血清白蛋白,優選來自人和非人物種的白蛋白的改進的dAbs，這將在疾病的動物模型中以及對于人的治療和/或診斷提供實用性。還期望在相對溫和和高親和力的抗-SA結合部分(dAbs)之間提供選擇。這種部分可以連接至藥物，根據設想的最終應用選擇抗-SA結合部分。根據抗-SA結合部分的選擇，這允許更好地定制藥物以治療和/或預防慢性或急性適應癥。還期望提供是單體或者在溶液中基本上如此的抗-SA?dAbs。以拮抗受體為目的，當抗-SA?dAb被連接到特異性結合細胞表面受體如TNFR1的結合部分例如dAb時，這是特別有利的。抗-SA?dAb的單體狀態在減少受體交聯的機會中是有用的，因為可以結合并交聯細胞表面上的受體(例如，TNFR1)的多聚體形成的可能性更小，從而增加了受體激動和有害的受體信號傳遞的可能性。

PCT/EP2010/052008和PCT/EP2010/052007公開了許多改進的dAbs，其公開內容被引用并入。

還期望提供具有改進穩定性的改進的dAbs。這對于允許dAb具有合適的穩定性特征或儲存時間是有利的。具體而言，期望提供具有暴露于升高的溫度后耐受解折疊(unfolding)的改進的能力，即改進的熱穩定性，的dAbs。還期望提供當形式為構建體如多特異性配體或者當綴合于蛋白、肽或NCE時具有改進的穩定性的dAbs。

發明概述

本發明的方面解決了這些問題。

為了這個目的，本發明人驚訝地發現，可以對DOM7h-11系的免疫球蛋白單一可變結構域分子進行突變，得到由相對于母體DOM7h-11分子的改進的熱穩定性所測定的分子的改進的穩定性。

在一個方面中，提供了DOM7h-11(DOM7h-11如圖1中所示)的抗-血清白蛋白(SA)免疫球蛋白單一可變結構域變體，所述變體具有至少54℃的T_m。在另一個方面中，提供了DOM7h-11(DOM7h-11如圖1中所示)的抗-血清白蛋白(SA)免疫球蛋白單一可變結構域變體，所述變體具有高于54℃的T_m。轉化中點(T_m)為其中50％蛋白是在其天然構象并且其它50％是變性的溫度。合適地，通過差示掃描量熱法測定所述T_m。

在一個實施方案中，與DOM7h-11相比，所述變體在22、42或91位(根據Kabat編號)中任何位置包含至少一個突變。合適地，抗-SA免疫球蛋白單一可變結構域變體是DOM7h-11-15(DOM7h-11-15如圖1(SEQ?ID?NO：7)中所示)的變體，與DOM7h-11-15相比，在22、42或91位(根據Kabat編號)中任何位置包含至少一個突變。在一個實施方案中，變體包含選自下列的至少一個突變：