[發明專利]用于確定LRRK2抑制劑的試驗

無效

• 申請號: 201180030200.6
• 申請日: 2011-04-19
• 公開（公告）號: CN102947339A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: D·阿萊西;R·J·尼克爾斯;N·澤姆科
• 申請（專利權）人: 醫學研究理事會
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N9/12;G01N33/573;C12Q1/48;G01N33/68
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種用于評估試驗化合物對基于細胞的系統中的LRRK2的作用的方法，所述方法包括步驟：

a）評估將含有LRRK2的基于細胞的系統暴露于試驗化合物中對LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化狀態的作用；和/或

b）評估將含有LRRK2的基于細胞的系統暴露于試驗化合物中對LRRK2與14-3-3多肽結合的作用。

2.根據權利要求1所述的方法，其中該方法包括，或進一步包括：評估將含有LRRK2的基于細胞的系統暴露于試驗化合物中對LRRK2的亞細胞定位的作用的步驟。

3.根據權利要求1或2所述的方法，進一步包括選擇認為對基于細胞的系統中的LRRK2具有抑制作用的化合物的步驟，其中，如果LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化在暴露后降低；和/或LRRK2與14-3-3多肽的結合在暴露后降低；和/或胞質池中的LRRK2的蓄積在暴露后降低，則選擇該試驗化合物。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，Ser910的磷酸化是使用特異性結合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗體或特異性結合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗體來評估的。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，Ser935的磷酸化是使用特異性結合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗體或特異性結合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗體來評估的。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，LRRK2與14-3-3多肽的結合是使用熒光共振能量轉移（FRET）評估的。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述基于細胞的系統為體外細胞系統。

8.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述基于細胞的系統為離體細胞系統。

9.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述基于細胞的系統為體內系統。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，在試驗動物中將所述包括LRRK2的基于細胞的系統暴露于試驗化合物中。

11.根據權利要求10所述的方法，其中，對取自試驗動物的細胞進行對LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化狀態的評估；和/或對LRRK2與14-3-3多肽結合的評估；和/或對胞質池中LRRK2蓄積的評估。

12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述取自試驗動物的細胞為取自試驗動物血液的細胞。

13.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述基于細胞的系統為破碎的細胞系統。

14.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述基于細胞的系統為基于淋巴樣干細胞的系統。

15.特異性結合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗體。

16.包括兩種或多種以下物質的試劑盒：

1）特異性結合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗體；

2）特異性結合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗體；

3）14-3-3多肽，或特異性結合于14-3-3多肽的抗體；和

4）熒光標記的LRRK2多肽，或編碼熒光標記的LRRK2的多核苷酸。

17.以下物質在用于評估試驗化合物對基于細胞的系統中的LRRK2的作用的方法中的應用：

1）特異性結合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗體；

2）特異性結合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗體；或特異性結合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗體；

3）14-3-3多肽，或特異性結合于14-3-3多肽的抗體；和/或

4）熒光標記的LRRK2多肽，或編碼熒光標記的LRRK2的多核苷酸。