[發明專利]晶體代謝物回收

有效

• 申請號: 201180017155.0
• 申請日: 2011-03-25
• 公開（公告）號: CN102822191A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: P.F.平德;S.格蘭維爾;S.雅各布森;S.卡斯嘉德
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/30
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

技術領域

本發明涉及非常有效的用于從連續離心過程中的發酵液獲得晶體和/或無定形代謝物懸液的方法。

背景技術

工業代謝物的發酵產量最近幾年急劇增加。代謝物如蛋白酶的產量如此之高，以致于發酵液中超過60%的蛋白酶可作為晶體和/或無定形沉淀存在。

已應用多種方法以供解決該以最有效的方式回收感興趣的代謝物的問題，參見例如WO?2008/110498，其中公開的方法包括用水稀釋發酵液，添加二價鹽，并將發酵液的pH值調整至低于pH?5.5的pH值。

公開于WO?2008/110498的方法需要許多水。因此本發明的目的是對上述問題提供有效的、需要較少水的方法。

發明內容

令人驚訝地發現了可在包含兩個入口和兩個出口的連續離心過程中產生從發酵液簡單而有效地產生晶體和/或無定形代謝物懸液的方法。所述方法包括：

(a)在離心機單獨的入口添加包含細胞和感興趣的代謝物的發酵液，其中所述代謝物部分或完全為晶體和/或無定形形式；

(b)在離心機另一個入口添加包含碳水化合物和/或鹽的水性液體，所述液體具有相對于細胞較高的密度和相對于沉淀形式的感興趣的代謝物較低的密度。

(c)在離心機單獨的出口移出細胞；和

(d)在離心機另一個出口移出包含感興趣的無定形代謝物和/或晶體的懸液。

附圖說明：

圖1顯示FEUX?510型Alfa?Laval?Separator?Centrifuge。該離心機通過安裝9個外周噴嘴(peripheral?nozzle)，并去除UX型配對管夾具(paring?tube?holder)而修飾為MBQX?510型。

發明詳述

本發明提供了簡單而有效的用于從發酵液產生晶體和/或無定形懸液的方法。

本發明的方法可應用于未經處理的發酵液，即，應用于不經稀釋，不添加任何化學品且無溫度調整而從發酵器直接取出的發酵液。本發明的方法亦可應用于首先進行了例如pH調整和/或溫度調整和/或稀釋的發酵液。

感興趣的代謝物

根據本發明的感興趣的代謝物可為商品化學品如檸檬酸或氨基酸。該代謝物亦可為蛋白質，例如，治療蛋白如胰島素或酶。該酶可為水解酶、轉移酶、裂合酶、異構酶、氧還酶或連接酶。

在一個優選實施方案中，所述方法應用于蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶和氧還酶。

蛋白酶

在一個優選實施方案中，所述蛋白酶是枯草桿菌蛋白酶或金屬蛋白酶。

枯草桿菌蛋白酶是使用包含Asp32、His64和Ser221(枯草桿菌蛋白酶BPN’編號)的催化三元組(triad)的絲氨酸蛋白酶。其包括任何屬于NC-IUBMB酶分類：EC?3.4.21.62的酶。

枯草桿菌蛋白酶可根據肽酶分類描述為：宗族(clan)SB，家族S8，MEROPS?ID:S08.001。

枯草桿菌蛋白酶描述于例如Barrett等1998.Handbook?ofProteolyticEnzymes.Academic?press,p.289-294。

對于本發明蛋白酶的來源和/或根據本發明的用途并無任何限制。因此，術語蛋白酶不僅包括天然或野生型蛋白酶，還包括其呈現蛋白酶活性的任何突變體、變體、片段等，以及合成的蛋白酶，如改組的蛋白酶和共有蛋白酶(consensusprotease)。此類遺傳工程改造的蛋白酶可如本領域中一般已知的方式制備，例如通過定位誘變，通過PCR(在PCR反應中使用含有所需突變的PCR片段作為一個引物)，或通過隨機誘變。共有蛋白的制備描述于，例如EP?897985。

優選的枯草桿菌蛋白酶是選自下組的枯草桿菌蛋白酶：枯草桿菌蛋白酶Carlsberg，枯草桿菌蛋白酶BPN’，枯草桿菌蛋白酶147，枯草桿菌蛋白酶309和枯草桿菌蛋白酶I168。