[發明專利]3D ADCC NK FACS測定法

有效

• 申請號: 201180008240.0
• 申請日: 2011-02-04
• 公開（公告）號: CN102741695A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: A.查蘭德;C.克萊因;M.庫比斯
• 申請（專利權）人: 霍夫曼-拉羅奇有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

1.一種用于在體外檢測抗體的效應器功能的方法，包括將包含腫瘤細胞和天然殺傷細胞的三維球狀體或聚集體與所述抗體一起溫育。

2.依照權利要求1的方法，包括下列步驟：

a)混合天然殺傷細胞和腫瘤細胞，

b)將每200μl約10⁴個細胞添加至多孔板的孔，

c)離心所述多孔板，并且由此誘導三維球狀體或聚集體的形成，

d)將抗體添加至所述多孔板的孔，

e)將所述多孔板溫育約20小時至約72小時，

f)通過熒光激活細胞分選來分析所述多孔板的孔中的細胞，并且由此檢測所述抗體的效應器功能。

3.依照權利要求2的方法，其特征在于所述天然殺傷細胞是人天然殺傷細胞。

4.依照前述權利要求中任一項的方法，其特征在于以10:1至1:10的比率混合所述天然殺傷細胞和腫瘤細胞。

5.依照權利要求4的方法，其特征在于所述比率是1:2至1:4。

6.依照前述權利要求中任一項的方法，其特征在于所述溫育持續約20小時至約28小時。

7.依照權利要求2至6中任一項的方法，其特征在于所述離心以1,000rpm持續10分鐘。

8.依照前述權利要求中任一項的方法，其特征在于所述腫瘤細胞是淋巴瘤細胞。

9.依照權利要求8的方法，其特征在于所述淋巴瘤細胞是Raji細胞、或SU-DHL4細胞、或Z138細胞。

10.依照權利要求2至9中任一項的方法，其特征在于以15μg/ml至0.1μg/ml的濃度添加所述抗體。

11.依照權利要求10的方法，其特征在于以8μg/ml至12μg/ml的濃度添加所述抗體。

12.包含腫瘤細胞和天然殺傷細胞的三維球狀體或聚集體用于測定眾多抗體與眾多腫瘤細胞的組合的效應器功能的用途。

13.一種用于在體外確定具有效應器功能的抗體的方法，包括：

a)混合天然殺傷細胞和腫瘤細胞，

b)將每200μl約10⁴個細胞添加至多孔板的孔，

c)離心所述多孔板，并且由此誘導三維球狀體或聚集體的形成，

d)將每種提供的抗體添加至所述多孔板的各個孔，

e)將所述多孔板溫育約20小時至約72小時，并

f)將具有超過1的死細胞與活細胞比率的抗體確定為具有效應器功能的抗體。

14.一種試劑盒，其包含：

a)用熒光染料標記的腫瘤細胞，

b)分離的天然殺傷細胞，

c)96孔多孔板，和

d)碘化丙啶。