[發明專利]診斷強直性脊柱炎的引物及用其診斷強直性脊柱炎的方法

無效

• 申請號: 201180005672.6
• 申請日: 2011-01-06
• 公開（公告）號: CN102762730A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 南昌勛;金延柱;白翰周
• 申請（專利權）人: 韓國科學技術研究院歐洲研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 金鮮英;馮云

技術領域

本發明涉及用于診斷強直性脊柱炎的引物，以及使用所述引物診斷強直性脊柱炎的方法。

背景技術

強直性脊柱炎（Ankylosing?spondylitis，AS）作為一類重度進行性脊錐關節病（severely?progressed?Spondyloarthropathy，SpA），它是一種慢性進行的系統性疾病，其特征在于，它始發于少年晚期（late?teenager）至二十幾歲早期（early?twenties），并在年齡達到三十幾歲到四十幾歲時顯示出諸如典型的脊椎關節強硬、骶髂關節和脊柱（spine）產生慢性炎癥反應、侵入到外周關節、眼、心臟或腸內等癥狀。

SpA的患病率根據各國情況而不同，但通常為1-2%。SpA限制了患者的活動，同時導致了對社會和經濟的負面影響。近期，根據有關SpA的進程和治療的新知識的積累，有報道指出早期治療對治療和抑制SpA的進程是有效的，早期診斷因而成為一個重要問題。

雖然尚未明確揭示SpA的病因，但有這樣的假設：遺傳異常、傳染病和/或免疫炎癥反應可能導致系統性風濕病之類的疾病，例如類風濕性關節炎或系統性紅斑狼瘡。一般來說，認為組織相容性抗原“HLA-B27”基因與上述疾病的發作有關。此外，近期的研究提出ERAP1（內質網氨肽酶1）和IL23R（白細胞介素23受體）基因與這些疾病具有聯系。因強制性脊柱炎導致的腰部和骶骨部疼痛發作較慢，而且在一些病例中還伴隨著膝部和踝部關節炎。因為癥狀不明確，加上癥狀會反復惡化和改善，因此很難將其與普通的背痛或非特異性的關節炎疼痛區別開來。根據歐洲的研究，從SpA癥狀的發作到AS的確診要耗費大約10年的時間。這樣一來，當患者就醫時，常常對該疾病的治療已為時過晚。

對AS的經典診斷是在患者的癥狀、病史以及骶骨關節和脊柱的放射學結果的基礎上進行的。更為甚者，僅當疾病進行到足夠程度時才能在放射學結果中顯示異常，故早期不可能通過放射學結果來作出診斷。最近MRI（磁共振成像）掃描用于早期診斷中。但由于這一測試方法昂貴而且耗時而在使用上受到了限制。血液中“HLA-B27”基因測試也被用于早期診斷中，但它對15%的患者給出了陰性結果而對眾多正常患者卻給出了假陽性的結果。此外，HLA-B27沒有提供任何有關預后和追蹤所述疾病進行程度的信息。

此外，較多的炎癥標記物（例如ESR（紅細胞沉降率）或CRP（C反應蛋白））不能反映AS活性，雖然這些標記物通常被用作許多風濕性疾病的疾病活性指數。因此，依然通過患者的主觀闡釋來對AS的治療和進展的反應進行評估。同時，在類風濕性關節炎患者中發現的類風濕因子或抗環瓜氨酸肽抗體被用作預后指數。換而言之，正指數表示發作且快速進行的關節炎，由此需要對具有正指數的患者進行早期積極治療。但還沒有針對AS的預后指數。

總而言之，除了用途有限的HLA-B27之外，還沒有能用于對AS進行早期診斷的生物標記，此外，也沒有反映AS預后的生物標記或者追蹤AS進行程度的活性指數。因此，對用于AS早期診斷、預后和/或追蹤其進行程度的生物標記的探索發現工作是龐大的。

發明內容

技術問題

本發明的目的是提供一種對AS進行早期診斷的方法。更具體來說，本發明提供了用來用于診斷AS的引物組、試劑盒和生物標記。

技術方案

本發明的一方面提供了用于診斷AS的引物組。在本發明的一種實施方式中提供了含有以下的引物組：（a）與SEQ?ID?NO：7具有至少95%的序列同源性的正向引物和（b）至少一個選自由SEQ?ID?NO：9-13的引物所組成的組中的反向引物。

在本發明的另一種實施方式中，提供了含有以下的引物組：（a）至少一個選自由具有SEQ?ID?NO：15-17的引物所組成的組中的正向引物和（b）與SEQ?ID?NO：19具有至少95%的序列同源性的反向引物。

在本發明名的再一實施方式中，提供含有以下的引物組：（a）與SEQID?NO：18具有至少95%的序列同源性的正向引物和（b）與SEQ?ID?NO：20具有至少95%的序列同源性的反向引物。

本發明的另一方面提供了一種使用上述引物組來診斷強直性脊柱炎的方法。在本發明的一種實施方式中，所述方法可以包括以下步驟：（a）用患者的生物樣品來合成cDNA（互補脫氧核糖核酸）；和（b）使用上述合成的cDNA和與本發明任一引物組具有至少80%的序列同源性的引物組進行PCR（聚合酶鏈式反應）；和（c）測定PCR產物的核酸序列。