[發(fā)明專利]一種降低頭孢菌素C分解的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110460235.5 | 申請日： | 2011-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN102533920A | 公開（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 于慧敏;王穎;張婧;羅暉;沈忠耀 | 申請（專利權(quán)）人： | 清華大學(xué) |
| 主分類號： | C12P35/02 | 分類號： | C12P35/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246 | 代理人： | 史雙元 |
| 地址： | 100084 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 降低 頭孢菌素 分解 方法 | ||
1.一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，首先，采用Red重組系統(tǒng)，將宿主菌的β-內(nèi)酰胺酶和乙酰基酯酶基因敲除，然后將頭孢菌素C酰化酶基因轉(zhuǎn)化入上述宿主菌，宿主菌表達(dá)頭孢菌素C酰化酶，然后采用細(xì)胞破碎、離心分離的方法制備頭孢菌素C酰化酶粗酶液，或者采用細(xì)胞破碎、離心分離和固定化方法制備固定化頭孢菌素C酰化酶粗酶，將制備的頭孢菌素C酰化酶粗酶液或固定化頭孢菌素C酰化酶粗酶加入到頭孢菌素C底物工作液中催化其生成7-氨基頭孢烷酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，所述Red重組系統(tǒng)包含3個輔助質(zhì)粒，分別為攜帶卡那霉素抗性基因的pKD13、攜帶Red同源重組酶的pKD46和攜帶FLP重組酶的溫敏質(zhì)粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，所述宿主菌為大腸桿菌或假單胞菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌E.coli?JM105、大腸桿菌E.coli?JM109(DE3)或大腸桿菌E.coli?BL21(DE3)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，所述將頭孢菌素C酰化酶基因轉(zhuǎn)化入宿主菌的過程中，需要質(zhì)粒載體攜帶頭孢菌素C酰化酶基因，所述質(zhì)粒載體為組成型表達(dá)載體或誘導(dǎo)型表達(dá)載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種降低頭孢菌素C分解的方法，其特征在于，所述組成型表達(dá)載體為pMKC質(zhì)粒表達(dá)載體；所述誘導(dǎo)型表達(dá)載體為pET質(zhì)粒表達(dá)載體。
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