[發(fā)明專利]葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質(zhì)量傳感檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110459803.X
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102565161A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉楠;高志賢;馬新華;歐國榮;李曉麗;陳翔
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/333
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質(zhì)量傳感檢測方法，其特征是包括如下步驟：

(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入0.05-0.2M的11-巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡8-16h，取出，用無水乙醇沖洗，氮氣吹干，分別標記為A、B和C電極；

(2)初始溶膠凝膠的制備：

將2～3mL原硅酸四乙酯，100～200μl苯基三甲氧基硅烷，100～200μl甲基三甲氧基硅烷，400～600μl濃度為0.05-0.2M的HCl水溶液和2～3ml的H₂O混合，超聲20～30分鐘制備成初始溶膠凝膠；

(3)含有SEA或SEB模板的印跡溶膠凝膠的制備：

取2～4mL初始溶膠凝膠和100～200μl濃度為0.1～0.3mg/mL的SEA磷酸鹽緩沖液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；

取2～4mL初始溶膠凝膠和100～200μl濃度為0.1～0.3mg/mL的SEB的磷酸鹽緩沖液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；

(4)對石英晶振電極表面進行涂布處理：

①以1000～3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻涂布于所述A電極表面20～30秒，以1000～3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻涂布于所述B電極表面20～30秒，靜置10～15分鐘，用水沖洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹干；

②重復步驟①3-5次；得到表面結(jié)合有分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下干燥；

③將步驟(2)獲得的初始溶膠凝膠，以1000～3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速均勻涂布于C電極表面20～30秒，靜置10～15分鐘，用水沖洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹干；

④重復步驟③3-5次；室溫下干燥；

(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB：

用40～50℃的雙蒸水對步驟(4)中步驟②獲得的電極進行沖洗，去除模板蛋白，用氮氣吹干，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，并置于室溫下干燥后備用；

用40～50℃的雙蒸水對步驟(4)中步驟④獲得的C電極進行沖洗，用氮氣吹干，得到參比電極，并置于室溫下干燥后備用；

(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質(zhì)量傳感器的構(gòu)建及待測液檢測：

將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B以及參比電極C分別置于三個加樣池中，并連接于石英晶體微陣列傳感器E4上，構(gòu)建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質(zhì)量傳感器，往各加樣池中加入200μl?PBS，待其頻率穩(wěn)定后分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200μl待測液，檢測頻率變化直至穩(wěn)定，檢測待測液中葡萄球菌腸毒素SEA或SEB。