[發明專利]氯胺酮膠體金檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201110457819.7
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102539773A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 張國華
• 申請（專利權）人: 上海凱創生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及膠體金免疫層析領域，具體涉及一種氯胺酮膠體金檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

氯胺酮(Ketamine，KET)是苯環己哌啶(N-1-phenycyclohexy-piperidine，PCP)的衍生物，醫學上作為外科手術麻醉劑，黑市上俗稱“K粉”、“K仔”。近年來在娛樂場所濫用日趨嚴重，嚴重威脅健康。氯胺酮通常的使用方式以香煙吸服、鼻吸、靜脈注射或將粉末溶入飲料中進行飲用。研究表明，在服用氯胺酮后都會出現“去人格化”、“去真實感”、人體形象改變、夢境、幻覺以及惡心嘔吐，大劑量服用，會出現意識模糊、身體呈木僵狀，呼吸抑制，甚至出現四肢抽搐以及呼吸停止等現象；長期使用氯胺酮可造成記憶缺失、認知功能損害和精神病。人體服用的氯胺酮有70％-90％在肝內代謝并經尿液排出，其在體內的代謝較快，清除半衰期約為2.5小時，一般在吸食后2-4小時內即可被檢出。

鑒于氯胺酮的嚴重危害性，國家對氯胺酮管理日趨嚴格，本領域對氯胺酮和濫用毒品者生物標本中的氯胺酮檢測提出了更高的要求。

膠體金免疫層析技術是近年來發展起來的一種獨特的免疫診斷技術，由于其具有特異性強、靈敏度高、簡單快速、易于操作、結果容易判讀，無需附加儀器設備等優點而被廣泛應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種氯胺酮膠體金檢測試劑盒及其制備方法，從而有效提高試劑盒的檢測靈敏度及質量。

本發明一方面公開了一種氯胺酮膠體金檢測試劑盒，包括試劑條，所述試劑條包括襯底、濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于襯底上；所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有包被有氯胺酮-牛血清白蛋白復合物的檢測線和包被有羊抗鼠IgG的質控線。

較優的，所述膠體金的顆粒大小為39～42nm。

較優的，所述膠體金是由兩步還原法制備獲得。

更優的，所述兩步還原法的步驟為：

a)第一次還原氯金酸溶液：制備濃度為0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加熱煮沸20-30分鐘，之后邊攪拌邊加入檸檬酸三鈉水溶液，HAuCl₄與檸檬酸三鈉的摩爾比為1∶8～9，超聲振蕩2-3分鐘后冷卻至室溫，即制得14～16nm粒徑的膠體金原溶液；

b)第二次還原氯金酸溶液：將第一步制得的膠體金原溶液放置4.0℃水浴中保持溫度恒定，隨后按膠體金原溶液與HAuCl₄水溶液體積比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/LHAuCl₄水溶液，隨后立即邊攪拌邊滴加4.0℃的抗壞血酸與PVP的混合水溶液，加入的抗壞血酸與本步驟加入的HAuCl₄的摩爾比為25～26∶1，加入的PVP與本步驟加入的HAuCl₄的重量比為1∶2.0～2.1，反應中保持溫度恒定，攪拌至反應完全，溶液呈透明的酒紅色，制得39-42nm粒徑的膠體金溶液；

兩步還原法中，配置各種水溶液均采用雙蒸水。

最優的，步驟a)中，加入檸檬酸三鈉水溶液的濃度為0.01-0.02mol/L。

最優的，步驟a)中，超聲震蕩的頻率為20-30KHZ。

最優的，步驟b)中，抗壞血酸與PVP的混合水溶液的滴加速度為1-2滴/s。

最優的，步驟b)中，所述抗壞血酸與PVP的混合水溶液中，抗壞血酸的濃度為0.017-0.019mol/L，PVP的濃度為0.137-0.139g/L。

步驟b)中，攪拌反應約為50-70分鐘。

采用上述方法制得的膠體金清亮透明，粒徑尺寸均一，無凝集顆粒，基本未發現非球形粒子。

較優的，所述免疫膠體金紙片是經過預處理的玻璃纖維紙，所述預處理的預處理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶劑為水。

更優的，所述免疫膠體金紙片是經過預處理的玻璃纖維紙，所述預處理的預處理液配方為：0.7v％Tween-20，16w/v％蔗糖。

本發明的另一方面，提供了一種氯胺酮膠體金檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1)兩步還原法制備膠體金；

2)用步驟1)制備的膠體金標記抗氯胺酮單克隆抗體，獲得膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體(免疫膠體金)；