[發明專利]氯胺酮膠體金檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201110457819.7
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102539773A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 張國華
• 申請（專利權）人: 上海凱創生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種氯胺酮膠體金檢測試劑盒，包括試劑條，所述試劑條包括襯底、濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于襯底上；其特征在于，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有包被有氯胺酮-牛血清白蛋白復合物的檢測線和包被有羊抗鼠IgG的質控線。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述膠體金的顆粒大小為39～42nm，所述膠體金是由兩步還原法制備獲得。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述免疫膠體金紙片是經過預處理的玻璃纖維紙，所述預處理的預處理液包括0.5～0.8v％?Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶劑為水。

4.如權利要求1-3任一權利要求所述的氯胺酮膠體金檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1)兩步還原法制備膠體金；

2)用步驟1)制備的膠體金標記抗氯胺酮單克隆抗體，獲得膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體；

3)免疫膠體金紙片的制備：預處理玻璃纖維紙；稀釋步驟2)獲得的膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體，得到免疫膠體金溶液；用所述免疫膠體金溶液包被預處理過的玻璃纖維紙，獲得免疫膠體金紙片；

4)將氯胺酮-牛血清白蛋白復合物和羊抗鼠IgG分別噴在硝酸纖維素膜檢測線和質控線的位置上，烘干備用，制得免疫硝酸纖維素膜；

5)將濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在膠板上，切裁制得試劑條；

6)將試劑條裝入塑料盒，即獲得氯胺酮膠體金檢測試劑盒。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述兩步還原法為：

a.第一次還原氯金酸溶液：制備濃度為0.0004-0.0005mol/L的HAuCl₄水溶液，加熱煮沸20-30分鐘，之后邊攪拌邊加入檸檬酸三鈉水溶液，HAuCl₄與檸檬酸三鈉的摩爾比為1∶8～9，超聲振蕩2-3分鐘后冷卻至室溫，即制得14～16nm粒徑的膠體金原溶液；

b.第二次還原氯金酸溶液：將第一步制得的膠體金原溶液放置于4.0℃水浴中保持溫度恒定，隨后按膠體金原溶液與HAuCl₄水溶液體積比1∶1.9～2.0加入4.0℃的0.003-0.004mol/L?HAuCl₄水溶液，隨后立即邊攪拌邊滴加4.0℃的抗壞血酸與PVP的混合水溶液，加入的抗壞血酸與本步驟加入的HAuCl₄的摩爾比為25～26∶1，加入的PVP與本步驟加入的HAuCl₄的重量比為1∶2.0～2.1，反應中保持溫度恒定，攪拌至反應完全，溶液呈透明的酒紅色，制得39-42nm粒徑的膠體金溶液；

兩步還原法中，配置各種水溶液均采用雙蒸水。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟a中，加入的檸檬酸三鈉水溶液的濃度為0.01-0.02mol/L，超聲震蕩的頻率為20-30KHZ。

7.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟b中，所述抗壞血酸與PVP的混合水溶液中，抗壞血酸的濃度為0.017-0.019mol/L，PVP的濃度為0.137-0.139g/L。

8.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)免疫膠體金紙片的制備為：

A.用噴金緩沖液稀釋膠體金標記的抗氯胺酮單克隆抗體，獲得OD₅₄₀值為2.0的免疫膠體金溶液；

B.用預處理液浸泡玻璃纖維紙，干燥后，再用免疫膠體金溶液噴涂預處理后的玻璃纖維紙，干燥，制得免疫膠體金紙片。

9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A中的噴金緩沖液配方如下：8～12v％?1.0M?Tris液，0.2～0.4w/v％聚乙二醇20000，0.15～0.25w/v％牛血清白蛋白，0.1～0.3w/v％脫脂牛奶，0.25～0.35w/v％酪蛋白，和0.02～0.08w/v％疊氮化鈉，用鹽酸調節pH至8.5±0.05，余量為水。

10.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟B中的預處理液包括0.5～0.8v％Tween-20，12～18w/v％蔗糖，溶劑為水。

11.權利要求1-3任一權利要求所述的試劑盒在制備氯胺酮檢測試劑中的應用。