[發明專利]一種富集分離內源轉錄因子及其復合物的方法及其專用轉錄因子串聯結合序列

有效

• 申請號: 201110457108.X
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102517282A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 秦鈞;丁琛;劉瓊明;劉明偉;劉萬霖;宋雷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所;美國貝勒醫學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N15/10;C07K1/22;C12Q1/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明屬于生物技術領域中目的蛋白的富集分離方法，特別是涉及一種富集分離內源轉錄因子及其復合物的方法及其專用轉錄因子串聯結合序列。

背景技術

人類基因組中約6％的基因編碼轉錄因子，是人類基因組編碼的第二大類蛋白。轉錄因子不僅在基因表達調控中扮演重要的角色，而且是細胞內信號轉導網絡的關鍵節點，細胞感受胞內、胞外刺激的各種信號通路通過轉錄因子相互交聯，從而形成一個復雜的信號網絡。因此，對轉錄因子及其復合物的研究一直受到極大的關注。然而，轉錄因子在細胞內的表達豐度極低(僅占細胞總蛋白的0.01-0.001％)，使得對轉錄因子及其形成的復合物的純化及鑒定非常困難，如通過傳統色譜方法進行轉錄因子的純化通常需要抽提成百升細胞培養物，通過10,000-100,000倍的富集得到的蛋白也僅夠用于化學和功能的分析。采用特異性抗體進行親和純化是分離純化轉錄因子復合物的有效手段，然而，一方面抗體成本太高，另一方面，目前僅少量的轉錄因子及其調節分子存在抗體，這大大限制了抗體親和純化方法的應用。迄今為止，僅有不到5％的轉錄因子得以純化和鑒定，因此，迫切需要發展新的技術方法對轉錄因子及其復合物進行分離純化、鑒定、重構，以及對其各個組分進行功能解析。

在基因表達調控過程中，轉錄因子通過與DNA順式元件結合發揮基因表達調控的作用。轉錄因子包括通用轉錄因子(如轉錄因子II(TF?II)復合物的各個組分、TATA-結合蛋白等)和特異轉錄因子(如Sp1、C/EBP、AP1等)。在基因轉錄過程中，特異轉錄因子與啟動子結合，招募通用轉錄因子結合到轉錄起始位點上游或下游40-60bp的DNA序列上，起始RNA的合成。近年來，越來越多的研究發現，DNA結合元件的結構特點會影響轉錄起始復合物的形成。換言之，當轉錄因子識別特定靶基因時，轉錄因子結合位點的核酸組成會影響輔調節子的招募，從而決定轉錄因子以激活子或抑制子影響靶基因的表達。為此，發展分離鑒定內源轉錄因子及其復合物的方法為解析與DNA結合后的轉錄因子復合物，進而了解特異轉錄因子對靶基因的轉錄調控至關重要。

轉錄因子的表達水平往往很低，用傳統方法在蛋白質組水平上分析轉錄因子表達譜通常很困難。分析轉錄因子表達譜或其動態變化時，在樣品制備過程中，需要采用特定的試劑(如抗體)及免疫沉淀策略對轉錄因子進行富集分離，但是由于抗體的成本比較高，同時抗體的種類有限，采用抗體進行免疫沉淀來富集分離轉錄因子的應用受到很大的限制，而且這種策略也僅能對個別轉錄因子進行分析，難以實現對所有轉錄因子的大規模富集分離和鑒定。

發明內容

本發明提供了一種富集分離內源轉錄因子及其復合物的方法及其專用轉錄因子串聯結合序列。