[發(fā)明專利]一種細胞分離介質(zhì)及細胞分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110456878.2
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102533650A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙侃;樊曉翔;高長青;丁銀巧;高錦
• 申請（專利權(quán)）人: 北京京蒙高科干細胞技術(shù)有限公司;北京市星奧同創(chuàng)科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;C12N5/078
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

1.一種用于單個核細胞分離的組合物，由分子量大于40kD的右旋糖酐、藥學(xué)上可接受的羥乙基淀粉與泛影酸鈉或泛影葡胺組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述右旋糖酐為Dextran?70或Dextran?40。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述羥乙基淀粉為羥乙基淀粉200/0.5或羥乙基淀粉130/0.4。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的組合物，其特征在于，右旋糖酐、羥乙基淀粉質(zhì)量比為1∶1、2∶1或3∶1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的組合物，其特征在于，所述單個核細胞為單核細胞或淋巴細胞。

6.一種復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，含有分子量大于40kD的右旋糖酐、藥學(xué)上可接受的羥乙基淀粉與泛影酸鈉或泛影葡胺，該分離介質(zhì)為生理溶液，其密度在1.060g/cm³和1.090g/cm³之間，滲透壓在280mOsmol/kg和310mOsmol/kg之間，pH在6和9之間，黏度為3.0-5.0cp。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，含有0-6％(w/w)的右旋糖酐70、0-10％(w/w)的泛影酸鈉、0-6％(w/w)的羥乙基淀粉200/0.5。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，含有1-3％(w/w)的右旋糖酐70、5-10％(w/w)的泛影酸鈉、1-3％(w/w)的羥乙基淀粉(200/0.5)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，還含有0-0.9％(w/w)的NaCl。

10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項所述的復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，其為無菌狀態(tài)。

11.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項所述的復(fù)方淋巴細胞分離介質(zhì)，其特征在于，其內(nèi)毒素含量＜0.5EU/ml。

12.一種分離樣品細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：將0-80ml權(quán)利要求6-11任一項所述淋巴細胞分離介質(zhì)加入離心管；

步驟2：再將利用抗凝劑處理過的平衡鹽溶液或無血清培養(yǎng)基稀釋后的樣品鋪在淋巴細胞分離介質(zhì)上，在溫度為4℃-30℃進行離心。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，步驟1為15ml離心管中裝入3-5ml分離介質(zhì)，或50ml離心管中裝入20-30ml分離介質(zhì)。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，步驟2所述稀釋的稀釋比例為1∶2-2∶1，優(yōu)選為1∶1-1∶1.5。

15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，步驟2所述離心的溫度為20-25℃，在100-800g的條件下進行離心；優(yōu)選的離心條件為300-500g，離心時間為15-30min。

16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述樣品選自外周血、臍帶血或骨髓。