[發(fā)明專利]一種基于外源動(dòng)物特征DNA地溝油快速檢測(cè)的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110456243.2
• 申請(qǐng)日: 2011-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN102586424A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石超;馬翠萍;葛玉潔;曹麗潔;王文碩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)地溝油的方法，以樣品油中不應(yīng)存在的動(dòng)物外源成分作為地溝油的鑒別依據(jù)，以動(dòng)物外源成分的線粒體特征DNA為檢測(cè)的具體靶標(biāo)，構(gòu)建地溝油快速、靈敏、特異的檢測(cè)方法。?

背景技術(shù)

目前，食品安全已成為社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)話題。其中，地溝油冒充食用油重新回流餐桌是其中一個(gè)突出的問(wèn)題。?

地溝油，也稱潲水油、泔水油，是質(zhì)量、衛(wèi)生極差，過(guò)氧化值、酸值、水分、羰基價(jià)、丙二醛、AFB1等指標(biāo)超標(biāo)的非食用油。它一般分為3類：一是狹義的地溝油，即將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單加工、提煉出的油；二是劣質(zhì)豬肉、豬內(nèi)臟、豬皮加工以及提煉后的油；三是用于油炸食品的油使用次數(shù)超過(guò)規(guī)定要求后，再被重復(fù)使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。地溝油中重金屬、毒素(如丙烯醛、黃曲霉毒素)、過(guò)氧化值等都嚴(yán)重超標(biāo)，并含有洗滌劑等類化學(xué)雜質(zhì)，對(duì)人體具有很大危害性，食用后會(huì)引起嘔吐、頭痛、腹瀉等不良反應(yīng)，長(zhǎng)期攝入會(huì)使細(xì)胞功能衰竭，甚至可成為癌變誘因。因此，地溝油嚴(yán)禁在食品中使用。據(jù)估計(jì)，每年返回餐桌的地溝油約有200～300萬(wàn)噸之多，這對(duì)社會(huì)與食品安全都造成非常大的危害。?

國(guó)外發(fā)達(dá)國(guó)家如美國(guó)、日本和歐盟等國(guó)家嚴(yán)格控制地溝油來(lái)源，只有專門公司才能進(jìn)行回收，或者采取政府補(bǔ)貼回收方式，高價(jià)回收地溝油，使之不能流入市場(chǎng)或餐桌。除了嚴(yán)格控制回收渠道之外，他們還有完善處罰條例。由于國(guó)外制訂了一系列法規(guī)，使地溝油很難再進(jìn)入食用油市場(chǎng)，因此對(duì)于食用油中摻地溝油的檢測(cè)研究很少。?

目前國(guó)內(nèi)對(duì)于地溝油的檢測(cè)主要有以下方面：利用正常食用油與地溝油在理化分析指標(biāo)上存在的差異，主要包括酸價(jià)、過(guò)氧化值、水分、碘值、皂化值等進(jìn)行檢測(cè)；利用地溝油在回收及加工過(guò)程中受到的重金屬污染進(jìn)行檢測(cè)；利用地溝油中含有的動(dòng)物油脂，通過(guò)檢測(cè)膽固醇含量進(jìn)行判定；利用電導(dǎo)率法進(jìn)行鑒定，油脂屬非導(dǎo)電物質(zhì)，電導(dǎo)率極低，且鈉鹽難溶于油脂，在正常食用油中含量很少。地溝油中殘?jiān)⒘＃幸欢葵}，還有酸敗產(chǎn)生化合物也會(huì)使電導(dǎo)率提高；利用薄層色譜法對(duì)地溝油經(jīng)高溫加熱或反復(fù)使用后產(chǎn)生的極性物質(zhì)(如丙稀酰胺、多環(huán)芳烴、醛基等)進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)油品有明顯極性組分拖尾現(xiàn)象時(shí)，即可判別是否為劣質(zhì)油；利用熒光法檢測(cè)，考慮到地溝油外源性污染物質(zhì)特性，針對(duì)餐具洗滌劑表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉混在地溝油里，而食用油不含這種人工合成化學(xué)物質(zhì)，可利用十?二烷基苯磺酸鈉在地溝油水相中特征熒光波峰為檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行地溝油的檢測(cè)。?

由于地溝油的主要成分與食用油相同，仍然是“甘油三酯”，可以和食用油以任意比例互溶，單憑人的感官，地溝油的色、香、味與普通食用油幾乎沒(méi)有分別。由于來(lái)源多樣、成分復(fù)雜，且勾兌比例不同，擺在專家面前的是千變?nèi)f化的非標(biāo)準(zhǔn)樣品，已很難通過(guò)感官分析和一些理化指標(biāo)進(jìn)行區(qū)分。即便是能探明底細(xì)的儀器也常常出現(xiàn)誤判。?

2011年，濟(jì)南格林生物能源有限公司跨省生產(chǎn)銷售地溝油案被公安部指揮破獲后，2011年9月衛(wèi)生部曾發(fā)布消息，全力組織科研攻關(guān)研究鑒別地溝油檢驗(yàn)方法。衛(wèi)生部征集到7家技術(shù)機(jī)構(gòu)研制的5種地溝油檢測(cè)方法，分別從多環(huán)芳烴、膽固醇、電導(dǎo)率和外源基因四大類核心指標(biāo)對(duì)地溝油進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)專家論證后，發(fā)現(xiàn)這些方法特異性都不強(qiáng)。?

朱旭平等通過(guò)對(duì)樣品油所含的外源動(dòng)物基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)的方法對(duì)地溝油進(jìn)行了檢測(cè)。其原理為：地溝油主要是由各種潲水、用于油炸食品中的油、劣質(zhì)動(dòng)物肉、內(nèi)臟、毛皮等加工及提煉后產(chǎn)出的油煉制而成，這些原料在煎炸烹飪和回收過(guò)程中往往會(huì)含有一些動(dòng)物性原料，因此含有其相應(yīng)的核酸成分，如豬、牛和魚類等哺乳動(dòng)物的特征基因殘留。目前市面上的合格食用油多為植物油，不存在動(dòng)物性基因成分。因此，通過(guò)判斷樣品油中是否含有動(dòng)物性基因成分，就可以推斷該樣品油是否為地溝油，或者樣品油中是否混有地溝油。該檢測(cè)方法在部分樣品的檢測(cè)中取得較好的效果，但地溝油的來(lái)源多樣、加工工藝不同，有的地溝油經(jīng)過(guò)高溫、粉碎、攪拌等生產(chǎn)處理，細(xì)胞核基因組往往被破壞，因此，該方法采用細(xì)胞核基因組基因作為檢測(cè)的對(duì)象，檢測(cè)的特異性不強(qiáng)，無(wú)法達(dá)到地溝油有效鑒定的預(yù)期目的。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種快速特異檢測(cè)地溝油的方法。?

本發(fā)明所提供的方法，稱為基于外源動(dòng)物特征DNA地溝油快速檢測(cè)的方法，包括以下內(nèi)容：?

1)動(dòng)物特征DNA序列的確定?