[發(fā)明專利]一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110455048.8
• 申請(qǐng)日: 2011-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102520195A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王立凱;潘學(xué)繼;單存海
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市協(xié)和醫(yī)藥科技集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征是包括如下組分：

1)嗜鉻粒蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品；

2)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體；

3)嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體包被的磁顆粒；

4)白色不透明微孔板；

5)洗滌液；

6)化學(xué)發(fā)光底物A及B工作液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征是所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體是用下述方法制成：

①稱取CgA單克隆抗體2.0mg，加入1～2ml濃度為0.05mol/L，pH＝7.5的碳酸鹽緩沖液溶解，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>

②稱取10.0mg的辣根過(guò)氧化物酶，加入1.0ml去離子水，振蕩，溶解后，取出0.14～0.28ml，加入0.1mol/L的NaIO₄溶液0.2ml，室溫下避光反應(yīng)1～2小時(shí)；

③將步驟①獲得的液體與步驟②的獲得的液體混合，室溫下避光反應(yīng)4～8小時(shí)；

④加入200μl濃度為5mg/ml的NaBH₄水溶液，室溫下避光反應(yīng)1～2小時(shí)；

⑤用0.02M?PBS透析12-24小時(shí)，用HPLC二次純化，收集蛋白峰并于-20℃下冷凍保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征是所述嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體包被的磁顆粒是用下述方法制成：

①取5mL磁顆粒質(zhì)量含量為2.5％的PBS溶液，用磁板分離棄上清，用去離子水洗磁顆粒；

②用0.02mol/L?pH＝6.2的PBS洗磁顆粒；

③用0.02mol/L?pH＝6.2的PBS調(diào)整總體積為5～10ml；

④加CgA單抗5mg放在搖床上進(jìn)行勻化10～20分鐘；

⑤加入碳二亞胺5～10mg；室溫，放在搖床上進(jìn)行勻化5～10小時(shí)；

⑥用0.1mol/L?pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液洗滌2次；

⑦加入Tris和EDTA，使Tris的含量為0.05mol/L，使EDTA的含量為0.004mol/L，調(diào)pH＝7.5，使抗體濃度為1.0mg/ml，2-4℃保存。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征是所述洗滌液的配制：

取：三羥甲基氨基甲烷6.05g；NaCl8.55g；Tween-20?0.5ml；加水至1L；用HCl調(diào)pH至7.5±0.1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征是所述化學(xué)發(fā)光底物A工作液是用下述方法制成：

(1)配制0.05mol/L?pH＝8.0的Tris-HCl緩沖液；

(2)向1000ml所述步驟(1)配制的Tris-HCl緩沖液中加入3～5mmol魯米諾，混勻；讓所述化學(xué)發(fā)光底物B工作液是用下述方法制成：

(1)配制0.05mol/L?pH＝8.0的Tris-HCl緩沖液；

(2)向1000ml所述步驟(1)配制的Tris-HCl緩沖液中加入：0.5～1.0mmol四苯硼鈉；1.42mmol鐵氰化鉀；0.38mmol肉桂酸；7.56mmol過(guò)氧化氫，混勻。

6.權(quán)利要求1的一種嗜鉻粒蛋白A化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒的制備方法，其特征是包括如下步驟：

1)準(zhǔn)備嗜鉻粒蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品；

2)制備辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體；

3)制備嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體包被的磁顆粒；

4)準(zhǔn)備白色不透明微孔板；

5)制備洗滌液；

6)制備化學(xué)發(fā)光底物A及B工作液。