[發明專利]雙抗體膠乳增強視黃醇結合蛋白檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201110454990.2
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102628867A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 李彥超;高愛民;劉希
• 申請（專利權）人: 北京九強生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本發明涉及一種雙抗體膠乳增強視黃醇結合蛋白檢測試劑盒，更具體而言，本發明公開了一種檢測視黃醇結合蛋白的雙抗包被膠乳增強免疫透射比濁試劑盒，其包括試劑1和試劑2以及校準品。

背景技術

視黃醇結合蛋白(retinol?binding?protein，RBP)由一條多肽鏈及小部分碳水化合物組成，不含中性糖和氨基已糖，由182個氨基酸構成；分子量為21KD；等電點pH4.4-4.8，半衰期3-12h。

RBP家族分成5類，包括分泌性RBP、細胞內RBP、視黃酸的核受體、視覺組織特異性的細胞外RBP和視覺組織特異性的細胞內RBP。

RBP廣泛分布于正常人體液中，具有從肝細胞中轉運視黃醇至周圍組織的功能。血液中RBP主要以視黃醇、前白蛋白結合的復合物形式存在，當復合物中的視黃醇與靶細胞結合后，RBP便與前白蛋白分離，自腎小球濾出，由近端腎小管上皮細胞吸收、降解。所以當腎小管重吸收功能出現障礙時，尿液中RBP含量升高。有文章表明通過與尿微量白蛋白、尿素、肌酐等指標比較，尿液中RBP是反映腎近曲小管損傷的敏感指標，能夠先其他項目出現異常。尿液中RBP的正常值范圍是不超過0.7mg/L，要求檢測試劑盒具有良好的靈敏度。

RBP主要在肝細胞中合成，作為視黃醇的載體蛋白，在肝內與視黃醇1∶1結合，體內90％的RBP與視黃醇結合形成holo-RBP，釋放入血后與前白蛋白以1∶1結合形成三維復合物，共同轉運視黃醇至周圍組織靶細胞。只有holo-RBP才可入血，在蛋白質營養不良時，肝的蛋白質合成不足，并引起RBP不足，視黃醇不能進入血液，視黃醇對RBP的分泌起調節作用，兩者呈正相關性。與前白蛋白一起參與維生素A的轉運，血清RBP和血清維生素A含量有高度相關性，認為RBP可以作為反映維生素A缺乏的敏感指標。分析營養性疾病患者的血漿蛋白變化發現血漿RBP的變化早于白蛋白和轉鐵蛋白，并與氮平衡的相關性高于白蛋白和轉鐵蛋白，表明血清RBP水平是反映營養性疾病療效的靈敏、特異性指標。血液中RBP的正常值范圍是男36-72mg/L、女22-53mg/L，要求檢測試劑盒有較寬的線性范圍。

目前檢測RBP的方法有單向免疫擴散RID、酶聯免疫吸附EIA、免疫比濁等。單向免疫擴散主要是手工操作，試驗重復性較差，檢測的準確度不高，臨床已經不再采用其為定量檢測方法。酶聯免疫吸附法的檢測限較差，并且費時。目前臨床進行大量樣本檢測常采用的方法是免疫比濁法。

目前可以應用到臨床進行大量標本檢測的方法有免疫比濁即免疫透射比濁和免疫散射比濁。免疫比濁法是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著樣本中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出樣本中抗原的含量。但是當抗原量很低時，抗原抗體結合物較少，不易形成濁度，所以靈敏度較低。于是在免疫比濁的基礎上發展了膠乳增強免疫比濁，其基本原理是：將抗體吸附在大小合適、均勻一致的膠乳顆粒上，當抗體和抗原結合后，易于發生凝集，由于交聯了膠乳顆粒使透過光減少，膠乳顆粒起到放大信號的作用，由此可以增大靈敏度。

雖然市場上有多種免疫透射比濁方法的試劑盒，但是由于靈敏度不足，均存在的缺點是同一試劑不能同時血清樣本和尿液樣本中的RBP，幾乎所有試劑盒均是用于血清樣本RBP的檢測。因此有需要研制一種能檢測尿液樣本和血清樣本中的RBP的試劑盒。

發明內容

因此，本發明的技術目的是提供一種能檢測尿液樣本和血清樣本中的RBP試劑盒。

因此，本發明的第一方面涉及一種檢測視黃醇結合蛋白的雙抗包被膠乳增強免疫透射比濁試劑盒，其包括試劑1和試劑2以及校準品，其中試劑1是含有具有促進凝聚作用的多聚物的緩沖液，試劑2是含有膠乳-抗體交聯物的緩沖液，校準品是血清基質或者尿液基質的至少5個不同濃度的校準液，其特征在于所述試劑2中的抗體是配對的單克隆抗體A和B，單克隆抗體A起到捕獲作用，單克隆抗體B起到檢測功能，優選地，單克隆抗體A、B選自鼠抗人、雞抗人、山羊抗人抗體，優選地，選自鼠抗人抗體。

優選地，試劑1中的多聚物選自PEG6000、PEG8000、PEG20000、TWEEN20和TWEEN80，濃度范圍為0.5-10％。