[發(fā)明專利]雙抗體膠乳增強(qiáng)視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110454990.2
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102628867A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李彥超;高愛民;劉希
• 申請（專利權(quán)）人: 北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其包括試劑1和試劑2以及校準(zhǔn)品，其中試劑1是含有具有促進(jìn)凝聚作用的多聚物的緩沖液，試劑2是含有膠乳-抗體交聯(lián)物的緩沖液，校準(zhǔn)品是血清基質(zhì)或者尿液基質(zhì)的至少5個(gè)不同濃度的校準(zhǔn)液，其特征在于所述試劑2中的抗體是配對的單克隆抗體A和B，單克隆抗體A起到捕獲作用，單克隆抗體B起到檢測功能，優(yōu)選地，單克隆抗體A、B選自鼠抗人、雞抗人、山羊抗人抗體，優(yōu)選地，選自鼠抗人抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：試劑1中的多聚物選自PEG6000、PEG8000、PEG20000、TWEEN20和TWEEN80，濃度范圍為0.5-10％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：試劑1、試劑2中的緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、Tris、MOPS，試劑1的pH范圍是6.0-9.0；試劑2的pH范圍是5.5-8.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：試劑2中單克隆抗體A用量為0.1-0.5mg/ml，單克隆抗體B用量為0.1-0.5mg/ml，優(yōu)選地，兩個(gè)單克隆抗體A和B分別與膠乳顆粒進(jìn)行包被，然后混合均勻，單克隆抗體A和B是兔抗人單克隆抗體或羊抗人單克隆抗體，優(yōu)選地，單克隆抗體A和B是鼠抗人單克隆抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：制備試劑2的交聯(lián)方法是化學(xué)交聯(lián)或物理吸附，優(yōu)選地，化學(xué)交聯(lián)中膠乳是羧基修飾的聚苯乙烯顆粒；物理吸附中膠乳是普通聚苯乙烯顆粒。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：膠乳顆粒的粒徑范圍為50-200nm，優(yōu)選地，與兩個(gè)單抗分別進(jìn)行包被的膠乳顆粒的粒徑相同或不同，優(yōu)選地，包被時(shí)膠乳顆粒的濃度范圍為0.1-0.5％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：試劑1、試劑2中均添加防腐劑，優(yōu)選地，疊氮鈉和PC300，優(yōu)選地，用量在0.01-0.3％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：試劑1中添加濃度為10-100mmol/L的EDTA。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：用于檢測血清的校準(zhǔn)品為血清基質(zhì)，濃度分別為130mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L、12.5mg/L、0mg/L；用于檢測尿液的校準(zhǔn)品為尿液基質(zhì)，濃度分別為4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0mg/L。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于：血清基質(zhì)校準(zhǔn)品和尿液基質(zhì)校準(zhǔn)品均含有0.01-0.1％的疊氮鈉、0.01-0.2％的制菌霉素。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的檢測視黃醇結(jié)合蛋白的雙抗包被膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其選自如下組合的試劑盒：

試劑盒1：

試劑1組分：

緩沖液MOPS?0.15mol/L?pH＝6.5，

PEG6000?10％，

NaN₃?0.1％，

EDTA?100mmol/L，

試劑2組分：

緩沖液MOPS?0.15mol/L?pH＝8.5，

單克隆抗體A?0.45mg/ml，其為鼠抗人抗體，抗抗原人尿提取視黃醇結(jié)合蛋白，效價(jià)大于1∶5000，

膠乳顆粒A，104nm，0.35％，用于包被單克隆抗體A，

單克隆抗體B?0.5mg/ml，其為鼠抗人抗體，抗抗原人尿提取視黃醇結(jié)合蛋白，效價(jià)大于1∶1000，

膠乳顆粒B，77nm，0.5％，用于包被單克隆抗體B，

校準(zhǔn)品A：血清校準(zhǔn)品，濃度分別為130、100、50、25、12.5、0mg/L，

校準(zhǔn)品B：尿液校準(zhǔn)品，濃度分別為4、2、1、0.5、0.25、0mg/L，

試劑盒2：

試劑1組分：

緩沖液Tris?0.05mol/L?pH＝9，

PEG6000?0.56％，

NaN₃?0.1％，

EDTA?10mmol/L，

試劑2組分：

緩沖液Tris?0.15mol/L?pH＝8.0，

單克隆抗體A?0.15mg/ml，其為鼠抗人抗體，抗抗原人尿提取視黃醇結(jié)合蛋白，效價(jià)大于1∶5000，

膠乳顆粒A，159nm，0.15％，用于包被單克隆抗體A，

單克隆抗體B?0.12mg/ml，其為鼠抗人抗體，抗抗原人尿提取視黃醇結(jié)合蛋白，效價(jià)大于1∶1000，

膠乳顆粒B，195nm，0.11％，用于包被單克隆抗體B，

校準(zhǔn)品A：血清校準(zhǔn)品，濃度分別為130、100、50、25、12.5、0mg/L，

校準(zhǔn)品B：尿液校準(zhǔn)品，濃度分別為4、2、1、0.5、0.25、0mg/L。