[發(fā)明專利]與血清中刀豆素A特異結(jié)合的組織蛋白酶D酶原ConA-pCD及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110454471.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN102492680A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 齊義軍;劉峰濤;楊永杰;劉瑞敏;林波;李濤;晁瑋霞;張軍;約翰遜·菲利普;馬遠(yuǎn)方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/64
• 分類號(hào): C12N9/64;G01N33/574
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種從血清中分離純化得到的與刀豆素A特異結(jié)合的組織蛋白酶D酶原ConA-pCD及其在制備血清學(xué)診斷肝癌試劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝癌是世界上六大常見的惡性腫瘤之一，每年全世界約有50～100萬(wàn)的新發(fā)病例。初次確診的肝癌患者中，僅有10～30%的病例適合治愈性治療（如采用外科手術(shù)、射頻消融術(shù)及原位肝臟移植術(shù)）。不僅如此，肝癌病人預(yù)后極差，5年生存率低于5%。影響肝癌病人長(zhǎng)期存活的主要原因之一是大多數(shù)肝癌患者確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，而中晚期肝癌的治療效果極差。顯然，提高肝癌治療效果、降低肝癌死亡率的關(guān)鍵在于早期診斷和治療。因而，對(duì)肝癌易患人群（慢性肝硬化患者、乙肝及丙肝病毒攜帶者）進(jìn)行隨訪、定期篩查，是檢出早期肝癌的有效手段。

目前肝癌高危人群篩查的主要手段是對(duì)高危人群定期（每6個(gè)月）進(jìn)行B超影像學(xué)和血清學(xué)甲胎蛋白(α-fetoprotein?,?AFP)的檢測(cè)。然而，B超影像掃描診斷肝癌的臨床應(yīng)用價(jià)值有限，包括高度依賴于操作者的專業(yè)技能、檢出病灶的最小直經(jīng)為3cm并且難以辨別增生結(jié)節(jié)的良惡性；而其它的影像學(xué)技術(shù)，如多層螺旋CT、釓貝葡胺增強(qiáng)MRI，由于診斷肝癌時(shí)費(fèi)用昂貴、檢查費(fèi)時(shí)，不適于常規(guī)高危人群篩查。盡管血清AFP檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于高危人群普查，但其診斷肝癌的敏感性和特異性分別為39-65%、76-94%，尤其在早期肝癌診斷中其敏感性更低（30-40%），而不適于肝癌高危人群監(jiān)測(cè)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)了許多新的肝癌血清學(xué)診斷標(biāo)志物，如甲胎異質(zhì)體(AFP-L3)、異常凝血酶（DCP）、高爾基體蛋白（GP73）、堿性磷酸酶肝同工酶、肝癌特異性γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶等，因而有學(xué)者提議這些新的標(biāo)志物單獨(dú)應(yīng)用或與AFP聯(lián)用，對(duì)肝癌易患的高危人群進(jìn)行監(jiān)測(cè)。然而，這些肝癌相關(guān)的新型標(biāo)志物的敏感性和特異性仍不理想，如AFP-L3和DCP診斷肝癌的敏感性和特異性分別為61-75%、90%，但AFP-L3與肝癌高度惡性和低分化密切相關(guān)，DCP對(duì)早期肝癌（<?2cm）診斷的敏感性僅為56.5%，阻礙了它們用于肝癌高危人群監(jiān)測(cè)。因此，亟需研發(fā)、鑒定肝癌診斷的新型血清標(biāo)志物。

蛋白質(zhì)糖基化修飾是最常見的蛋白質(zhì)翻譯后的修飾之一，人體內(nèi)約有50%的蛋白發(fā)生了糖基化修飾。糖蛋白的寡糖側(cè)鏈賦予了蛋白質(zhì)分子重要的生理功能，如蛋白構(gòu)像、蛋白的運(yùn)輸及分類、穩(wěn)定性及活性、亞細(xì)胞定位、蛋白質(zhì)分子間及細(xì)胞間相互作用、識(shí)別等功能；并且還參與了許多疾病的病理過(guò)程，如蛋白質(zhì)分子糖基化程度及寡糖側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的變異是腫瘤及其它多種疾病形成與進(jìn)展過(guò)程中的基本特性之一。蛋白質(zhì)的異常糖基化見于人類多種腫瘤，并與癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程密切相關(guān)。因此，許多目前臨床應(yīng)用的腫瘤診斷標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)多為糖蛋白，如CA125（卵巢癌）、PSA（前列腺癌）、Her2/neu(乳腺癌)、CEA（結(jié)直腸癌、乳腺癌、胰腺癌及肺癌）等。

根據(jù)寡糖側(cè)鏈共價(jià)結(jié)合的氨基酸殘基不同，可將糖蛋白分為Ｎ-連接糖蛋白（與天冬酰胺殘基酰胺氮相連）和Ｏ-連接糖蛋白（與絲氨酸、蘇氨酸或羥賴氨酸殘基的羥基共價(jià)結(jié)合）。Ｎ-連接糖蛋白寡糖鏈分支增多及復(fù)雜化與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如肝癌患者血清中觸珠蛋白（haptoglobin,?HP）β鏈的三天線型寡糖側(cè)鏈增多，而肝硬化患者則以雙天線型寡糖側(cè)鏈為主；高度惡性肝癌的AFP寡糖側(cè)鏈易發(fā)生巖藻糖基化，即AFP-L3產(chǎn)生；巖藻糖基化的GP73異質(zhì)體診斷肝癌的敏感性提高；肝癌患者血清中αl-酸性糖蛋白(AAG)常發(fā)生異常巖藻糖基化修飾。日本和美國(guó)先后將AFP-L3增加為肝癌診斷的血清學(xué)標(biāo)志物之一，充分證實(shí)蛋白質(zhì)N-連接糖基化的變異與肝癌的發(fā)生和演進(jìn)過(guò)程密切相關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種從血清中分離純化、與刀豆素A（Concanavalin,?ConA）特異結(jié)合的組織蛋白酶D酶原（ConA-pro-cathepsin?D,?ConA-pCD）及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：

一種與血清中刀豆素A特異結(jié)合的組織蛋白酶D酶原ConA-pCD，由下述方法制得：