[發明專利]梅花遺傳圖譜構建方法

無效

• 申請號: 201110454348.4
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN103184277A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 張啟翔;孫麗丹;徐宗大;張杰;陳晶鑫
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

技術領域

本發明屬于植物基因工程領域，具體涉及一種梅花遺傳圖譜構建方法。

背景技術

梅花(Prunus?mume?Sieb.et?Zucc.)是中國目前唯一獲得國際品種登錄權的植物，雖然近幾十年對梅花的研究成績斐然，在種質資源(包滿珠，1993；劉青林，1996；康素紅和劉曉祥，1997；張永春和劉小祥，1999)、繁殖生理(胡金良和徐漢卿，1994；徐漢卿和王慶亞，1995；趙守邊和劉小祥，1999)等研究領域取得相當的進展，但是在分子育種方面比較滯后。

遺傳圖譜的構建具有重要的應用價值。分離群體是構建遺傳圖譜使用的遺傳材料，群體親本的選擇直接影響到構建遺傳圖譜的難易程度及圖譜的應用范圍。由于農作物育種歷史悠久，生長周期短，構建近交系、純系群體相當容易，但是果樹類、林木類等多年生木本植物生長周期長，高度雜合等特點，目前在樹木中多利用擬測交策略構建遺傳圖譜(Weeden?et?al.1994；Yamamoto?et?al.2002)。由于梅花分布廣、資源變異豐富，不同生態區域的梅花，其遺傳基礎相差較大，加上梅花起源復雜、有性生殖困難等特性，目前還沒有獲得一張梅花的遺傳圖譜，嚴重限制了梅花的分子育種工作的開展。

發明內容

本發明的目的在于提供一種梅花遺傳圖譜構建方法。

本發明提供的梅花遺傳圖譜構建方法，其包括如下步驟：

1)構建梅花F₁代擬測交群體；

2)提取父母本及其子代基因組DNA；

3)利用限制性內切位點相關的DNA測序方法對父母本及其子代基因組進行重測序，獲得符合孟德爾遺傳規律的單核苷酸多態性標記；

4)根據所獲得的單核苷酸多態性標記，應用擬測交策略構建梅花遺傳圖譜。

本發明中，根據作圖親本選配原則，選擇結實率高，子房飽滿的梅花品種為母本，選擇花藥飽滿，散粉量大，花粉生活力高的梅花品種為父本，在保留母本花萼的情況下，用鑷子去雄，采取一次授粉的方法，進行人工雜交選育，用收獲的子代構建F₁代擬測交群體。

其中父本花藥在溫度20～25℃，濕度10～40％下，散粉15～20小時，收集花粉。收集的花粉可立即授粉，也可以在干燥條件下4℃冷藏備用。

優選的，以‘粉瓣’為母本，以‘扣子玉蝶’為父本進行雜交，構建F₁代擬測交群體。

本發明的一個實施方案中，利用限制性內切酶對父母本及其子代基因組DNA進行酶切，利用Solexa方法對純化的父母本及其子代的酶切片段進行單末端測序，使用SOAPsnp軟件獲得符合孟德爾遺傳規律的單核苷酸多態性標記。

在獲得符合孟德爾遺傳規律的單核苷酸標記后，根據卡平方檢驗作圖群體中符合孟德爾期望分離比為1∶2∶1或1∶1的標記，P＜0.01，過濾掉SNP分子標記中偏分離的標記，利用JoinMap3.0的軟件，設置LOD≥3，構建梅花高密度遺傳圖譜。

本發明在克服梅花品種結實率低、育種周期長，構建F₁群體困難的基礎上，利用二代測序技術對父母本及其子代進行重測序，通過RAD的方法和擬測交策略相結合快速構建梅花的遺傳圖譜，該方法為快速構建木本植物高密度圖譜提供新的思路和方法，促進其遺傳圖譜構建進程。

附圖說明

圖1A為梅花遺傳圖譜1～4連鎖群。

圖1B為梅花遺傳圖譜5～8連鎖群。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。

實施例1構建擬測交群體

本實施例選擇梅花品種‘粉瓣’為母本，主要性狀為：花芽1-2朵著生，主要分布在短花枝和中花枝，花極繁密，花徑2.99cm(2.75-3.31cm)，花蕾粉色，頂端有復色，花瓣為5-8枚，單瓣淺碗型，粉色，有色暈，子房飽滿，柱頭發育良好，結實率高；‘扣子玉蝶’為父本，主要性狀：花芽1-2朵著生，主要分布在短花枝和束花枝，花較繁密，花徑2.32cm(1.6-2.68cm)，花蕾頂端有復色，花瓣為14-16枚，重瓣淺碗型，白色，花藥飽滿，散粉量大，花粉的生活力高。