[發明專利]利用乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法

無效

• 申請號: 201110454288.6
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102532256A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 陳新峰;周利根;張治國;王君虹
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/14
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明涉及食品制備技術領域，具體涉及一種乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法。

背景技術

紫菜(Porphyra)因其具有很高的營養價值和重要的保健功能一直受到人們的關注，紫菜蛋白質含量為干重的30％，其中大部分為藻膽蛋白。

藻膽蛋白由藻紅蛋白、藻藍蛋白和別藻藍蛋白組成。藻膽蛋白在醫藥、食品行業中的應用已經引起廣泛關注，高純度藻膽蛋白已經在藥品行業中有所應用。目前藻膽蛋白的提取開發主要從螺旋藻等藻類中提取，原料價格較貴，提取費用大，后續純化工藝復雜，且工業化生產難度大，目前市場上相關藻膽蛋白產品甚少。

藻膽蛋白一般是通過原料高速搗碎后采用單一的飽和硫酸銨梯度沉淀法提取。原料經高速組織搗碎后，離心分離得到上清液I，先經10％飽和硫酸銨處理，離心，得到上清液II；再向上清液II繼續添加硫酸銨固體達到50％飽和度，靜置后離心得到的藻膽蛋白。飽和硫酸銨梯度沉淀法，需要硫酸銨用量大，且成品硫酸銨殘留濃度高，后續脫除硫酸銨的處理方法采用超濾或透析法，超濾法對設備要求高，不適合大規模生產；透析法處理時間長，耗水量大，不環保。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種工藝簡潔、得率高的利用乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種利用乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法，依次包括以下步驟：

(1)、干紫菜粉碎和浸泡：

將干紫菜粉碎后按固液比1g/12～17ml添加蒸餾水，浸泡20～50min；得漿狀紫菜懸浮液；

(2)、濕紫菜的機械破碎提取分離：

將膠體磨磨盤間隙調整至4～10μm，處理漿狀紫菜懸浮液30～120s，所得的汁液離心，分別得上清液I和沉淀；

(3)、沉淀加水，經超聲波提取分離：

在步驟(2)所得的沉淀中加入蒸餾水，所述蒸餾水與步驟(1)中的干紫菜的料液比為1～3ml/2g；攪拌均勻后，經300～800W超聲波處理20～60min，離心，得上清液II；

(4)、低濃度硫酸銨處理：

將上清液I和上清液II合并后所得的合并液中加入粉末狀的硫酸銨，于3～5℃靜置20～50min，離心，得上清液III；所述每L合并液中加入25～90g(較佳為50～80g)的硫酸銨；

(5)、乙醇雙水相分離紫菜藻膽蛋白：

在所述上清液III中加入硫酸銨，得紫菜藻膽蛋白溶液；所述每L紫菜藻膽蛋白溶液中含有硫酸銨170～320g(較佳為170～250g)；

在所述紫菜藻膽蛋白溶液中添加乙醇，所述紫菜藻膽蛋白溶液與乙醇的體積比為2～1∶1；于3～5℃靜置1～5h后，出現清晰的分層(分成上中下三層)；取中間相(即中間層)，離心；得紫菜藻膽蛋白沉淀；

(6)、洗滌：

將步驟(5)所得的紫菜藻膽蛋白沉淀用蒸餾水以0.45μm微孔濾膜抽濾洗滌2～4次；

(7)干燥、粉碎：

將步驟(6)所得的洗滌后的紫菜藻膽蛋白沉淀經真空冷凍干燥、粉碎，得到紫菜藻膽蛋白。

作為本發明的利用乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法的改進：步驟(2)、步驟(3)、步驟(4)和步驟(5)中的離心均為：3000～5000rpm離心分離5～15min。

乙醇雙水相：是指乙醇與無機鹽之間，在水中以適當的濃度溶解后形成的互不相溶的兩相或多相水相體系，各相所含物質基本相同，但各相中乙醇和硫酸銨分配比例發生變化。

本發明的利用乙醇雙水相法提取紫菜藻膽蛋白的方法，具有以下優勢：

一、本發明采用膠體磨和超聲波聯用法破碎紫菜蛋白，具有破碎處理量大，處理時間短，細胞破碎率高等優點，在提高細胞破碎率的基礎上，有利于提高紫菜藻膽蛋白的提取率。

二、本發明采用乙醇雙水相分離紫菜藻膽蛋白，將紫菜藻膽蛋白的分離、純化和降低硫酸銨殘留合為一體，相比硫酸銨梯度沉淀，藻膽蛋白提取率基本一樣，但乙醇雙水相分離不僅提高了藻膽蛋白的純度，而且也降低了藻膽蛋白中硫酸銨的殘留，簡化硫酸銨脫除工藝，即簡化了紫菜藻膽蛋白的提取工藝，有利于工業化生產。

三、本發明對紫菜藻膽蛋白采用真空冷凍干燥，最大限度保留紫菜蛋白的生物活性，并能在低溫條件下保存期長，既可以作為加工輔料應用于食品加工行業；也可以作為制備生物活性多肽的原料，得到進一步的高值化開發利用；即，有利于后續的開發利用。

綜上所述，本發明不但簡化了分離、純化工藝，有利于工業規模化生產，還提高了紫菜藻膽蛋白的提取得率。