[發明專利]一種檢測抗β2糖蛋白Ⅰ抗體的試劑裝置及其方法

有效

• 申請號: 201110454005.8
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN103185801A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 胡德明;劉清波;何林;陽輝
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

1.一種檢測抗β2糖蛋白I抗體的試劑裝置，其特征在于：所述的試劑裝置為長條狀，包括具有八個孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應孔和稀釋孔，樣本孔內盛有待測樣本，輔劑孔供檢測有需要時加入輔助試劑使用，酶結合物孔內盛有酶結合物溶液，底物孔內盛有底物溶液，終止液孔內盛有終止液，稀釋液孔內盛有稀釋液，反應孔為平底且具有高的光通透性，孔內包被有β2糖蛋白I抗原，并作為反應容器加注待測的液體樣本和檢測試劑及洗滌液，反應終止后進行吸光度測定，稀釋孔作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時用。

2.根據權利要求1所述的試劑裝置，其特征在于：所述的試劑裝置中，輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔和稀釋液孔上覆蓋有密封薄膜。

3.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于：所述的手柄上粘貼有條形碼，該條形碼標識有抗β2糖蛋白I抗體檢測試劑及分析裝置的相關信息。

4.根據權利要求3所述的試劑裝置，其特征在于：所述的信息包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量檢測標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。

5.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于：所述試劑裝置還包括若干個支撐柱，所述的支撐柱位于所述試劑裝置中基體的下面，相鄰支撐柱之間間隔有一個以上的孔位。

6.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于：所述試劑裝置中反應孔由外孔和內孔構成，外孔的底部開有底孔，內孔穿過底孔且與底孔緊配合，外孔和內孔之間留有防溢腔。

7.根據權利要求6所述的試劑裝置，其特征在于：所述試劑裝置中反應孔的內孔包被的β2糖蛋白I抗原包括天然的人β2糖蛋白I、天然的牛β2糖蛋白I或重組的人β2糖蛋白I。

8.一種利用權利要求1-7所述的試劑裝置進行抗β2糖蛋白I抗體檢測的方法，其特征在于：所述的方法包括如下的步驟：

1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本；

2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中；

3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；

4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進行稀釋；

5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋；

6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25～37℃的條件下，孵育30～60min；

7)用洗滌液對反應孔進行3～5次洗滌后移除液體；

8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25～37℃的條件下，反應30～60min后移除液體；

9)重復步驟7)；

10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25～37℃的條件下，反應10～20min；

11)從終止液孔中吸取終止液加入反應孔中，1～10min內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm～690nm。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：

1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本，體積至少為樣本孔容量的1/4；

2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中，吸取的量為孔內液體總量的7/10以上；

3)移除稀釋液孔中的剩余液體，根據預期稀釋倍數從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；

4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進行稀釋，稀釋倍數為1～10倍；

5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋，稀釋倍數為1～100倍；

6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25～37℃的條件下，孵育30～60min；

7)用洗滌液對反應孔進行3～5次洗滌后移除液體；

8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25～37℃的條件下，反應30～60min后移除液體；

9)重復步驟7)；

10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25～37℃的條件下，反應10～20min；

11)從終止液孔中吸取終止液加入反應孔中，1～10min內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm～690nm。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：

1)在所述的樣本孔中加入樣本80～150μL；

2)用精密加液器從稀釋液孔中吸取360μL液體到稀釋孔中；

3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180μL液體回稀釋液孔；

4)用精密加液器從樣本孔中吸取20μL液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；

5)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20μL到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；

6)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體100μL到反應孔中，25～37℃下，孵育60min后移除液體；

7)用洗滌液對反應孔進行3～5次洗滌后移除液體；

8)用精密加液器從酶結合物孔中吸取100μL辣根過氧化物酶標記的抗體酶結合物溶液至反應孔進行反應，25～37℃下，反應30min后移除液體；

9)重復步驟7)；

10)用精密加液器從底物孔中吸取100μL的TMB底物溶液至反應孔中反應10～15min；

11)用精密加液器從終止液孔中吸取100μL的終止液加注至反應孔中，1～10min內于450nm和630nm雙波長條件下進行檢測，讀取OD值。