[發明專利]一種定量檢測肌酸激酶同工酶的熒光免疫層析方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201110453813.2
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102520173A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 王東
• 申請（專利權）人: 深圳康美生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

1.一種定量檢測肌酸激酶同工酶CK-MB的熒光免疫層析方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1)用化學交聯或生物分子間特異性作用將肌酸激酶同工酶CK-MB的特異性抗體連接到量子點表面，得到抗體修飾的量子點，所述抗體修飾的量子點的發射波長范圍為550～1300nm；

步驟2)將步驟1)得到的抗體修飾的量子點固定在標記墊上，且標記墊上同時固定有質控分子修飾的量子點，所述質控分子修飾的量子點的發射波長與步驟1)得到的抗體修飾的量子點的發射波長不同，且波長范圍為550～1300nm，在層析膜上分別設有定量帶和質控帶，其中質控帶固定有能與所述質控分子特異性結合的生物分子，定量帶固定有對應CK-MB的與步驟1)所述特異性抗體不同抗原決定簇的特異性抗體；

步驟3)以樣品墊、標記墊、層析膜、吸水墊和底板構建成熒光免疫層析試紙條，其中所述層析膜為弱熒光層析膜，底板具低熒光特性；

步驟4)試紙條免疫層析后，檢測定量帶和質控帶熒光信號強度，并以質控帶熒光信號強度校正定量帶熒光信號強度，進而實現CK-MB的定量檢測。

2.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟1)所述抗體修飾的量子點的發射波長為650nm，步驟2)所述質控分子修飾的量子點的發射波長為570nm。

3.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟1)所述抗體修飾的量子點的發射波長為900nm，步驟2)所述質控分子修飾的量子點的發射波長為600nm。

4.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟1)所述量子點為單一化合物形成的量子點或幾種化合物組成的復合量子點。

5.根據權利要求4所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，所述化合物為選自ZnS、CdS、HgS、MgS、CdSe、MgSe、ZnSe、PbSe、PbSe、CdTe、MgTe、ZnTe、HgTe、InAs、InP中的任意一種或幾種，且可摻雜Cu、Mn和Hg。

6.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟3)所述層析膜在大于550nm時熒光很弱或不含熒光劑。

7.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟3)所述底板為黑色，表面附有不干膠，且兩者均不含熒光劑。

8.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟3)所述熒光免疫層析試紙條還包括能使樣本中液體與細胞分離的過濾膜。

9.根據權利要求1所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，步驟4)所述免疫層析為預潤免疫層析，其中預潤免疫層析為先以緩沖液預潤層析膜，再加入樣本到樣品墊中，樣本流經定量帶和質控帶后，進行熒光定量檢測。

10.根據權利要求9所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，所述預潤層析膜為將緩沖液直接滴加于層析膜。

11.根據權利要求9所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，當所述預潤層析膜為將緩沖液間接滴加于層析膜時，步驟3)所述熒光免疫層析試紙條還包括潤濕墊和連接墊，其中潤濕墊分別與層析膜和連接墊以毛細作用接觸，連接墊分別與潤濕墊和吸水墊以毛細作用接觸。

12.根據權利要求9所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，所述緩沖液為pH?7.2～11的堿性緩沖液。

13.根據權利要求12所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，所述堿性緩沖液為包含牛血清白蛋白、酪蛋白和表面活性劑的堿性緩沖液。

14.根據權利要求12所述的熒光免疫層析方法，其特征在于，所述堿性緩沖液為包含牛血清白蛋白和吐溫20的pH9.0的磷酸緩沖液。