[發(fā)明專利]一種藍(lán)莓胚狀體培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110450531.7
• 申請(qǐng)日: 2011-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN103181323A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王安亭;王祖華;李永程;關(guān)潤(rùn)伶;黃向東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 洛陽(yáng)理工學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 鄭州中原專利事務(wù)所有限公司 41109
• 代理人: 霍彥偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種珍奇果品種藍(lán)莓胚狀體培養(yǎng)，屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

利用葉片來(lái)誘導(dǎo)愈傷組織在組培學(xué)上非常常見。藍(lán)莓都用單芽枝進(jìn)行組織分化叢生芽，叢生芽雖然比較容易培養(yǎng)，但這對(duì)于大量培養(yǎng)藍(lán)莓苗木，是非常緩慢的。2007?年第5期《分子植物育種》寧志怨等用藍(lán)莓叢生芽的誘導(dǎo)及植株再生即嫩葉的單芽枝培養(yǎng)藍(lán)莓植株，當(dāng)ZT的濃度過(guò)高時(shí)即超過(guò)2.0?mg/L，會(huì)形成大量的不定芽，出現(xiàn)一些愈傷組織和玻璃化苗，降低有效苗的數(shù)量；2010年第9期《北方園藝》，于強(qiáng)波等用藍(lán)莓半質(zhì)化新稍培養(yǎng)藍(lán)莓植株，很容易發(fā)生褐化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種快速培養(yǎng)藍(lán)莓胚狀體的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種藍(lán)莓胚狀體培養(yǎng)方法，用長(zhǎng)出2-3個(gè)月葉子的藍(lán)莓作為外植體，配制培養(yǎng)基后，將外植體滅菌和接種，愈傷組織繼代，誘導(dǎo)單細(xì)胞，單細(xì)胞分化，培養(yǎng)胚狀體。

所述配制培養(yǎng)基的配方為：

愈傷組織繼代培養(yǎng)基配方：WPM+ZT0.1~0.5mg/L?+2,4-D?1~4mg/L?+?NAA?0.3~1.4mg/L?+?6-BA?1.0~4.0mg/L?+?蔗糖20g/L?+?PVP?0.5~1g/L?+?瓊脂?5.2g/L，PH?5.2~5.8，溫度25℃，黑暗培養(yǎng)；

單細(xì)胞培養(yǎng)配方：WPM?+?ZT0.1~0.5mg/L?+?2,4-D?1~4mg/L?+?NAA0.5?~1.5mg/L?+6-BA?1.0~4.0mg/L+蔗糖20g/L?+?PVP?0.5~1g/L?+?瓊脂?5.2g/L，PH?5.2~5.8，溫度25℃，黑暗培養(yǎng)；

單細(xì)胞脫分化配方：1/2WPM?+?6-BA?1.0~3.0mg/L?+?NAA0.5~1.6?mg/L?+?KT?0.1~1.5?mg/L?+?蔗糖15~40g/L?+?PVP?0.5g~1?g/L，PH?5.2-5.8，溫度25℃，黑暗培養(yǎng)；

胚狀體培養(yǎng)配方：WPM?+?ZT?0.1~2mg/L?+?IBA?1.0~2.0?mg/L+瓊脂5.2g/L，PH?5.2-5.8，溫度25℃，光照12h培養(yǎng)。

所述將外植體滅菌和接種的具體操作為：外植體用流水沖洗0.5h，將外植體刷干凈，加入吐溫幾滴，放在流水下沖洗20~30min；處理好的外植體用酒精滅菌1min，再用升汞滅菌3min，用無(wú)菌水洗5~8遍，放入無(wú)菌水中待接種；滅菌好的外植體用剪刀減掉邊緣，剪斷葉脈；遠(yuǎn)軸面向上接種到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上。

所述愈傷組織繼代的具體操作為：將誘導(dǎo)出的愈傷組織剪下，接種到愈傷組織培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，將繼代長(zhǎng)出的愈傷組織再繼代兩次。

所述誘導(dǎo)單細(xì)胞的具體操作為：將繼代好的愈傷組織接種到繼代液體培養(yǎng)基上，加入珍珠巖，以200轉(zhuǎn)/分鐘震蕩培養(yǎng)。

所述單細(xì)胞分化的具體操作為：從搖床上取出單細(xì)胞培養(yǎng)液，靜置，取上層清液，然后接入單細(xì)胞誘導(dǎo)液體培養(yǎng)基，放在搖床上溫度設(shè)成：25℃，轉(zhuǎn)數(shù)200轉(zhuǎn)/min，黑夜培養(yǎng)三天。

所述胚狀體培養(yǎng)的具體操作為：震蕩培養(yǎng)2-3d后瓶中出現(xiàn)渾濁，光強(qiáng)調(diào)為5000勒克斯，再靜置培養(yǎng)12h，然后取上層清液接種到單細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-8d。

本發(fā)明的有益效果是：利用藍(lán)莓葉子誘導(dǎo)到藍(lán)莓的愈傷組織，再將愈傷組織培養(yǎng)出單細(xì)胞，再將單細(xì)胞誘導(dǎo)出藍(lán)莓胚狀體，利用藍(lán)莓的胚狀體來(lái)培養(yǎng)藍(lán)莓植株，減少不定芽和玻璃化苗的形成，提高有效苗的數(shù)量；采用PVP就可以使得愈傷組織不發(fā)生褐化，這對(duì)藍(lán)莓愈傷組織很適用。培養(yǎng)速度快，可以在五個(gè)月內(nèi)培養(yǎng)出十萬(wàn)支藍(lán)莓組培苗；.培養(yǎng)出來(lái)的苗木長(zhǎng)勢(shì)基本一樣；培養(yǎng)出的苗木植株品質(zhì)較高，植物病毒比較少。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1