[發明專利]一種藍莓胚狀體培養方法

無效

• 申請號: 201110450531.7
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103181323A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 王安亭;王祖華;李永程;關潤伶;黃向東
• 申請（專利權）人: 洛陽理工學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 鄭州中原專利事務所有限公司 41109
• 代理人: 霍彥偉

1.?一種藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：用長出2-3個月葉子的藍莓作為外植體，配制培養基后，將外植體滅菌和接種，愈傷組織繼代，誘導單細胞，單細胞分化，培養胚狀體。

2.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述配制培養基的配方為：

愈傷組織繼代培養基配方：WPM+ZT0.1~0.5mg/L?+2,4-D?1~4mg/L?+?NAA?0.3~1.4mg/L?+?6-BA?1.0~4.0mg/L?+?蔗糖20g/L?+?PVP?0.5~1g/L?+?瓊脂?5.2g/L，PH?5.2~5.8，溫度25℃，黑暗培養；

單細胞培養配方：WPM?+?ZT0.1~0.5mg/L?+?2,4-D?1~4mg/L?+?NAA0.5?~1.5mg/L?+6-BA?1.0~4.0mg/L+蔗糖20g/L?+?PVP?0.5~1g/L?+?瓊脂?5.2g/L，PH?5.2~5.8，溫度25℃，黑暗培養；

單細胞脫分化配方：1/2WPM?+?6-BA?1.0~3.0mg/L?+?NAA0.5~1.6?mg/L?+?KT?0.1~1.5?mg/L?+?蔗糖15~40g/L?+?PVP?0.5g~1?g/L，PH?5.2-5.8，溫度25℃，黑暗培養；

胚狀體培養配方：WPM?+?ZT?0.1~2mg/L?+?IBA?1.0~2.0?mg/L+瓊脂5.2g/L，PH?5.2-5.8，溫度25℃，光照12h培養。

3.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述將外植體滅菌和接種的具體操作為：外植體用流水沖洗0.5h，將外植體刷干凈，加入吐溫幾滴，放在流水下沖洗20~30min；處理好的外植體用酒精滅菌1min，再用升汞滅菌3min，用無菌水洗5~8遍，放入無菌水中待接種；滅菌好的外植體用剪刀減掉邊緣，剪斷葉脈；遠軸面向上接種到誘導愈傷組織培養基上。

4.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述愈傷組織繼代的具體操作為：將誘導出的愈傷組織剪下，接種到愈傷組織培養基上繼代培養，將繼代長出的愈傷組織再繼代兩次。

5.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述誘導單細胞的具體操作為：將繼代好的愈傷組織接種到繼代液體培養基上，加入珍珠巖，以200轉/分鐘震蕩培養。

6.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述單細胞分化的具體操作為：從搖床上取出單細胞培養液，靜置，取上層清液，然后接入單細胞誘導液體培養基，放在搖床上溫度設成：25℃，轉數200轉/min，黑夜培養三天。

7.?根據權利要求1所述的藍莓胚狀體培養方法，其特征在于：所述胚狀體培養的具體操作為：震蕩培養2-3d后瓶中出現渾濁，光強調為5000勒克斯，再靜置培養12h，然后取上層清液接種到單細胞誘導培養基上，培養5-8d。