[發明專利]從紅果小檗粗提物中篩選出的1型艾滋病病毒蛋白酶抑制劑及其應用

有效

• 申請號: 201110450083.0
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103184264B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 饒子和;楊誠;郭宇;唐延婷;牛國君;孫玉桃;汪穎;李智
• 申請（專利權）人: 天津市國際生物醫藥聯合研究院
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12N9/50;A61K36/29;A61K31/4375;A61P31/18;G01N21/64
• 代理公司: 北京德恒律師事務所11306
• 代理人: 陸鑫,房嶺梅

技術領域

本發明涉及一種抗艾滋病毒物質的篩選方法及其應用，具體通過熒光底物和晶體浸泡聯合篩選艾滋病病毒蛋白酶抑制劑，在天然產物中采用生物活性跟蹤測試分離純化出的一系列化合物組分對HIV-1蛋白酶的抑制活性，直至最終分離純化出成分單一的天然產物小分子抑制劑。

背景技術

艾滋病，醫學全名為“獲得性免疫缺陷綜合癥”(Acquired Immune Deficiency Syndrome--AIDS)，現在科學研究普遍認為是人體感染了人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，簡稱HIV)所導致的傳染病。艾滋病病毒屬于逆轉錄病毒科(Retroviridae)，慢病毒(lentivirus)屬，靈長類免疫缺陷亞屬。現已證實HIV分為兩型：HIV-1型和HIV-2型，其中IV-2主要分布于非洲西部，在歐洲和美洲的一些感染者中也被檢測到，但毒力和傳播力都低于HIV-1，引起的艾滋病病程較慢且較緩和。HIV-1廣泛分布于世界各地，是引起全世界AIDS流行的病原，目前HIV的研究也是以HIV-1為主進行的。艾滋病病毒可透過直接接觸黏膜組織的口腔、生殖器、肛門等或帶有病毒的血液、精液、陰道分泌液、乳汁而傳染。艾滋病病毒自從20世紀80年代由撒哈拉以南的非洲地區蔓延以后，至今已成為全球性的大流行病之一，目前，科學家尚未發現能夠完全抵御艾滋病病毒的疫苗，也沒有找到能夠根治艾滋病的藥物，因此，開發針對HIV的特效藥物一直是一個世界性的難題。

艾滋病病毒主要感染人體免疫系統內廣泛存在的輔助型T細胞，巨噬細胞以及樹突狀細胞。病毒進入細胞內后，將啟動由Reverse Transcriptease(逆轉錄酶)主導的轉錄過程，將病毒自身的單鏈RNA逆轉錄為雙鏈DNA，然后在integrase(整合酶)的作用下，將病毒DNA插入人體自身的DNA中，跟隨宿主本身DNA的復制而復制。并且利用宿主的復制機器表達自身需要的蛋白。在病毒蛋白表達完成之后，由艾滋病病毒蛋白酶將未成熟蛋白切割形成成熟的蛋白，組裝得到成熟的病毒顆粒后繼續感染下一個細胞。

HIV的基因組主要編碼了結構蛋白，調控蛋白以及輔助蛋白。其中結構蛋白包括Gag，Pol以及Env。Gag基因表達形成一段55kD的蛋白，在HIV-1Protease(艾滋病病毒蛋白酶)的作用下，切割形成四段小蛋白，分別是基質蛋白MA(p17)，衣殼蛋白CA(p24)，核衣殼蛋白NC(p9)，以及p6蛋白；Gag-Pol融合蛋白在HIV-1Protease(艾滋病病毒蛋白酶)的作用下切為四個小蛋白，分別是蛋白酶(p10)、逆轉錄酶(p50)、RNA酶H(p15)、及整合酶(p31)。Env最初是在內質網內合成，是一段分子量為88kD的蛋白質，在向高爾基體的轉運過程中被糖基化而成為分子量160kD(gp 160)的包膜糖蛋白前體。gp160被宿主體內的蛋白酶切割為gp 120和gp41兩部分，gp120位于感染細胞和毒粒的表面，稱外膜蛋白，gp41鑲嵌于病毒的脂質雙層中，稱跨膜蛋白，在病毒感染過程中能夠介導病毒脂膜與細胞膜的融合。除此之外，HIV基因組中還編碼了tat，nef，rev，vpu，vpr，vif等調控和輔助蛋白。

從艾滋病病毒的生活周期和基因組成可以看出，艾滋病病毒蛋白酶對于艾滋病病毒的生存與繁殖具有至關重要的作用，如果能夠有效的抑制艾滋病病毒蛋白酶的活性，那么艾滋病病毒將無法形成新的成熟的病毒顆粒，從而阻止獲得性免疫缺陷癥(AIDS)的發生。