[發(fā)明專利]從紅果小檗粗提物中篩選出的1型艾滋病病毒蛋白酶抑制劑及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110450083.0
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103184264B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 饒子和;楊誠;郭宇;唐延婷;牛國君;孫玉桃;汪穎;李智
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12N9/50;A61K36/29;A61K31/4375;A61P31/18;G01N21/64
• 代理公司: 北京德恒律師事務(wù)所11306
• 代理人: 陸鑫,房嶺梅

1.一種抗艾滋病病毒物質(zhì)的篩選方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1).制備艾滋病病毒蛋白酶，并結(jié)晶得到艾滋病病毒蛋白酶的晶體；

(2).制備天然產(chǎn)物提取物，所述提取物包括通過提取、溶劑萃取或大孔樹脂、硅膠等柱層析分離純化得到的各個部位；

(3).將步驟(2)得到的天然產(chǎn)物提取物溶于有機溶劑；使用緩沖溶液對步驟(1)中的艾滋病病毒蛋白酶溶解、稀釋，然后將兩種溶液混合得到混合溶液，配制熒光底物溶液，再將熒光底物溶液加入上述混合溶液中；

(4).檢測樣品的熒光強度變化，并與不加入天然產(chǎn)物提取物的陰性對照品比較，得到具有抑制艾滋病病毒蛋白酶的活性天然產(chǎn)物提取物；

其中，所述艾滋病病毒蛋白酶為1型人類免疫缺陷病毒蛋白酶，制備所用HIV-1protease質(zhì)粒的氨基酸序列為PQITLWQRPLVTIKIGGQLKEALLDTGADDTVLEEMNLPGRWKPKMIGGIGGFIKVRQYDQILIEICGHKAIGTVLVGPTPVNIIGRNLLTQIGCTLNF；

采用活性追蹤的方法，對確定的具有活性的天然產(chǎn)物提取物進一步分離純化，對分離純化的組分重復(fù)步驟(3)和(4)，如此多級分離、純化和步驟(3)-(4)的活性測定，最終得到具有活性的單體化合物，所述單體化合物為小檗堿或其藥學上可接受鹽；

步驟(2)所述的天然產(chǎn)物提取物為紅果小檗經(jīng)過乙醇提取、乙酸乙酯萃取然后用HP-20型大孔樹脂柱層析分離，得到30％-80％的乙醇洗脫部位。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的篩選方法，其特征在于：步驟(3)所述的有機溶劑選自：戊烷、己烷、辛烷、環(huán)己烷、環(huán)己酮、甲苯環(huán)己酮、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、乙醇、異丙醇、乙醚、醋酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮、甲基丁酮、甲基異丁酮、乙二醇單甲醚、乙二醇單乙醚、乙二醇單丁醚、乙腈、吡啶、二甲基亞砜、二氯甲酰胺。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的篩選方法，其特征在于：步驟(3)所述的熒光底物為MCA-γ-Abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Lys(Dnp)-Lys-NH2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的篩選方法，其特征在于：步驟(4)所述的陰性 對照品為不加入天然產(chǎn)物提取物，用1μL100％DMSO代替，其余制備條件與天然產(chǎn)物提取物相同。