[發(fā)明專利]用于T淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110449120.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102517213A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧邁迪生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12M3/00
• 分類號(hào): C12M3/00;C12N5/0783
• 代理公司: 沈陽(yáng)科威專利代理有限責(zé)任公司 21101
• 代理人: 刁佩德

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于處理人外周血、臍帶血、胸水、腹水等樣品中的單個(gè)核細(xì)胞成為細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（Cytokine-Induced?Killer，簡(jiǎn)稱CIK）的試劑盒，特別是一種用于T淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)試劑盒，該試劑盒可以應(yīng)用于臨床細(xì)胞生物治療，也可以應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、臨床應(yīng)用研究及生物技術(shù)研究，尤其可以應(yīng)用于免疫系統(tǒng)研究和腫瘤殺傷作用的研究。

背景技術(shù)

隨著腫瘤對(duì)人類生存健康的威脅日益嚴(yán)重，應(yīng)對(duì)腫瘤的治療模式也發(fā)生著日新月異的變化，各種新藥物、新技術(shù)、新方法層出不窮，其中細(xì)胞生物治療是繼手術(shù)、放療和化療后發(fā)展的第四類腫瘤治療方法，成為腫瘤生物治療中重要的發(fā)展方向。癌癥是腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)視系統(tǒng)的細(xì)胞疾病，機(jī)體免疫功能的缺陷是癌癥發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵。機(jī)體的抗腫瘤免疫主要為T(mén)淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)。細(xì)胞生物治療技術(shù)將自體免疫細(xì)胞經(jīng)體外誘導(dǎo)、分化、擴(kuò)增再回輸至體內(nèi)，繞過(guò)體內(nèi)腫瘤免疫障礙機(jī)制，通過(guò)激發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)來(lái)對(duì)抗、抑制和殺滅癌細(xì)胞。繼淋巴因子激活殺傷細(xì)胞、浸潤(rùn)腫瘤淋巴細(xì)胞及分化抗原（Cluster?of?Differentiation,?簡(jiǎn)稱CD）3單抗激活的殺傷細(xì)胞后，CIK的殺瘤作用日益受到重視。

CIK細(xì)胞是1991年由美國(guó)斯坦福大學(xué)施密特等首次報(bào)道。他們發(fā)現(xiàn)在體外模擬人體內(nèi)環(huán)境的條件下，外周血淋巴細(xì)胞可以被多種細(xì)胞因子定向誘導(dǎo)并增殖為一群具有高效細(xì)胞毒活性的異質(zhì)效應(yīng)細(xì)胞。由于該細(xì)胞群同時(shí)表達(dá)CD3、CD8和CD56膜蛋白分子，故又稱為自然殺傷細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和自然殺傷細(xì)胞的非主要組織相容性復(fù)合物限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)，可特異性聚集于腫瘤局部發(fā)揮抗瘤殺瘤作用。CIK細(xì)胞在體內(nèi)歸巢于脾臟和淋巴結(jié)，在肝臟中分布最多，其次是外周血。其中CD3⁺、CD8⁺、CD56⁺是CIK細(xì)胞群中的主要效應(yīng)細(xì)胞，在正常人外周血中僅占淋巴細(xì)胞的1-5%，而在體外經(jīng)多種因子刺激培養(yǎng)10-25天后，細(xì)胞數(shù)量較培養(yǎng)前可增加1000倍以上。

與其他過(guò)繼性免疫治療細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞具有增殖快、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣、副作用小、對(duì)正常骨髓造血影響輕微等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)化療耐藥的腫瘤細(xì)胞株有殺傷作用，而對(duì)正常造血集落細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有影響。通過(guò)取病人少量單個(gè)核細(xì)胞，在體外特定條件下制備出大量CIK細(xì)胞，回輸體內(nèi)后直接發(fā)揮有效清除腫瘤作用，尤其對(duì)手術(shù)后或放化療后患者效果顯著，能消除殘留微小的轉(zhuǎn)移病灶，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫力，并實(shí)現(xiàn)了延長(zhǎng)患者生存期，快速提高患者生活質(zhì)量等多重目標(biāo)。因此，CIK被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的優(yōu)選細(xì)胞。目前腫瘤生物治療中心應(yīng)用樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic?Cell，簡(jiǎn)稱DC）和CIK細(xì)胞聯(lián)合回輸?shù)姆椒ǎ糜趷盒院谏亓觥⒛I癌、肺癌、肝癌、食道癌、胃癌、膀胱癌等疾病治療。但目前各個(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)CIK的方法，使用材料，培養(yǎng)時(shí)間均不一致，導(dǎo)致有效細(xì)胞的培養(yǎng)周期、質(zhì)量和數(shù)量參差不齊，給臨床應(yīng)用帶來(lái)了效果不穩(wěn)定的風(fēng)險(xiǎn)因素。

另外，在中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)枮?00910045790.4的“一種CIK細(xì)胞及其制備方法和細(xì)胞制劑”中，公開(kāi)了一種CIK細(xì)胞及其制備方法和細(xì)胞制劑。其記載的CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)因子組合為植物血凝素、抗CD3單抗和抗CD28單抗。該方案中所使用的植物血凝素是一種有絲分裂原，能激活小淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，繼而分裂增殖，釋放淋巴因子，提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能，但由于其較難提純，且成本極高，所以一直以來(lái)僅在實(shí)驗(yàn)室中作為刺激淋巴細(xì)胞增殖的試劑，很難應(yīng)用于臨床的大規(guī)模使用。在中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)枮?00310109565.5的“一種CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)方法”中，公開(kāi)了一種CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。該培養(yǎng)方法同樣采用了植物血凝素和抗CD3單克隆抗體兩種有絲分裂原聯(lián)合激活細(xì)胞，雖然能夠增強(qiáng)細(xì)胞的刺激強(qiáng)度，但該方法需要借助生物反應(yīng)器完成，不僅成本高，使用不方便，且不利于醫(yī)學(xué)研究和臨床應(yīng)用。

綜上，現(xiàn)有CIK細(xì)胞（T淋巴細(xì)胞）體外培養(yǎng)方法急需改進(jìn)，同時(shí)也更有必要設(shè)計(jì)與之相符的規(guī)范的試劑盒來(lái)保證培養(yǎng)方法的及時(shí)、準(zhǔn)確、順利進(jìn)行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于T淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)試劑盒，該試劑盒可以用于T淋巴細(xì)胞體外定向分選、誘導(dǎo)、分化、培養(yǎng)、擴(kuò)增。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：該用于T淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)試劑盒，其技術(shù)要點(diǎn)是：試劑盒內(nèi)容物中包括：

用于盛裝液體的無(wú)菌離心管；

用于吸放液體的無(wú)菌移液管；

用于分選細(xì)胞的細(xì)胞分選液；