[發明專利]用哺乳動物細胞系生產禽呼腸孤病毒與疫苗

有效

• 申請號: 201110448196.7
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103184194A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;A61K39/15;A61P31/14
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種用細胞系生產禽呼腸孤病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將收獲的禽呼腸孤病毒，接種至長滿單層的哺乳動物細胞系，使用細胞維持液培養；

2)接種培養后，收獲禽呼腸孤病毒。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)進一步為以下步驟：a)使用禽腎細胞對禽呼腸孤病毒繼代；b)將經過繼代處理的禽呼腸孤病毒，接種于長滿單層的哺乳動物細胞系，使用細胞維持液培養，至出現CPE大于75％時，收獲禽呼腸孤病毒，作為制苗用毒種；c)將收獲的禽呼腸孤病毒，接種至長滿單層的哺乳動物細胞系，使用細胞維持液培養；

所述步驟2)中接種培養的時間為6天后，收獲禽呼腸孤病毒。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳細胞系為Vero細胞系、MDCK細胞系、PK-15細胞系、Marc145細胞系、ST細胞系、IBRS-2細胞系任意一種或幾種細胞系。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞系為Vero細胞系或MDCK細胞系。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中還包括在接種前使用禽腎細胞繼代處理的禽呼腸孤病毒。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述繼代處理的次數為14代～18代。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)的收獲禽呼腸孤病毒的效價為大于4×10⁷TCID₅₀/ml。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的禽呼腸孤病毒是禽呼腸孤病毒AV2311株。

9.一種根據權利要求1～8任意一項所述的方法制備的禽呼腸孤病毒，其特征在于，使用哺乳動物細胞系生產禽呼腸孤病毒。

10.一種用哺乳動物細胞系生產禽呼腸孤病毒滅活疫苗的方法，其特征在于，使用權利要求9所述的禽呼腸孤病毒，加入滅活劑，滅活后加入獸藥學上可接受的疫苗佐劑，乳化后獲得禽呼腸孤病毒滅活疫苗。

11.一種根據權利要求10所述的方法制備的禽呼腸孤病毒滅活疫苗，其特征在于，使用哺乳動物細胞系生產禽呼腸孤病毒滅活疫苗。