[發明專利]用于外源蛋白可溶性表達的質粒及其制備和應用方法無效
| 申請號： | 201110446386.5 | 申請日： | 2010-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN102533835A | 公開（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發明（設計）人： | 張大兵;梁婉琪;袁政;申慧峰 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/67;C12N15/64;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220 | 代理人： | 鄭立 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 蛋白 可溶性 表達 質粒 及其 制備 應用 方法 | ||
1.一種用于外源蛋白可溶性表達的表達載體，其特征在于，所述表達載體包含有分子伴侶FaeE的編碼序列。
2.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為原核細胞表達載體。
3.一種用于外源蛋白可溶性表達的大腸桿菌質粒，其特征在于，所述質粒包含有分子伴侶FaeE的編碼序列。
4.根據權利要求3所述的質粒，其特征在于，所述的分子伴侶FaeE的編碼序列的5’端添加了大腸桿菌核糖體結合位點。
5.根據權利要求3所述的質粒，其特征在于，所述質粒還含有T7啟動子、lac操縱子、T7終止子，所述的分子伴侶FaeE的編碼序列位于T7啟動子和lac操縱子的調控下，并通過T7終止子進行終止。
6.根據權利要求5所述的質粒，其特征在于，所述質粒還含有由BamH?I、EcoR?I、Sac?I、Hind?III、Hot?I、Xho?I限制性內切酶識別位點組成的多克隆位點，位于所述的分子伴侶FaeE的編碼序列和所述的T7終止子之間。
7.根據權利要求6所述的質粒，其特征在于，所述質粒還含有6個His-tag基因，位于所述的多克隆位點和所述的T7終止子之間。
8.根據權利要求3所述的質粒，其特征在于，所述質粒為pET30e，序列如Seq?ID?No.1所示。
9.根據權利要求3-7中任一權利要求所述的質粒，其特征在于，所述質粒還包括所述外源蛋白的編碼序列，與所述的分子伴侶FaeE的編碼序列位于同一個表達單元。
10.根據權利要求9所述的質粒，其特征在于，所述外源蛋白是霍亂毒素B亞基(CTB)。
11.根據權利要求9所述的質粒，其特征在于，所述外源蛋白是過氧化物酶前體(PRX)。
12.根據權利要求9所述的質粒的應用方法，其特征在于，所述方法包括：將所述的質粒分子轉化大腸桿菌感受態細胞得到重組大腸桿菌菌落，經接種培養得到菌體細胞后實現可溶性表達的提高。
13.根據權利要求12所述的應用方法，其特征在于，所述的大腸桿菌感受態細胞是大腸桿菌BL21(DE3)。
14.根據權利要求13所述的應用方法，其特征在于，所述的轉化方法是熱激法。
15.一種制備用于外源蛋白可溶性表達的表達載體的方法，其特征在于，所述方法包括：將分子伴侶FaeE的編碼序列克隆進所述表達載體中而獲得所述的用于外源蛋白可溶性表達的表達載體。
16.根據權利要求15所述的方法，其特征在于，所述表達載體是原核細胞表達載體。
17.根據權利要求15所述的方法，其特征在于，所述表達載體是大腸桿菌質粒。
18.根據權利要求17所述的方法，其特征在于，所述的大腸桿菌質粒是表達載體pET30a。
19.根據權利要求18所述的方法，其特征在于，通過Nde?I和BamH?I兩個限制性內切酶將所述的分子伴侶FaeE的編碼序列克隆進所述的表達載體pET30a。
20.根據權利要求18所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：使所述的分子伴侶FaeE的編碼序列位于T7啟動子和lac操縱子的調控下。
21.根據權利要求17所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：在將分子伴侶FaeE的編碼序列克隆進大腸桿菌質粒前，在分子伴侶FaeE編碼序列的5’端添加大腸桿菌核糖體結合位點。
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