[發明專利]緊密枝頂孢霉菌株及其特異性脂肪酶

有效

• 申請號: 201110446326.3
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN103184159A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 毛愛軍;錢丗均;佟小雪;寇秀芬;張國青;丁雙
• 申請（專利權）人: 豐益(上海)生物技術研發中心有限公司;中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/20;C12R1/645
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊帆

技術領域

本發明涉及一種新的脂肪酶及其生產菌株。具體說，本發明脂肪酶是一種新的1，3-特異性脂肪酶，本發明生產菌株是緊密枝頂孢霉菌株2823。

背景技術

脂肪酶(E.C.3.1.1.3)亦稱酰基甘油水解酶，是一類具有多種催化能力的酶，可催化三酰甘油酯及其它一些水不溶性酯類的水解，還可以催化酯交換反應、醇解反應、轉酯化及酯類的逆向合成反應，以及生物表面活性劑的合成、旋光異構體的拆分和手性藥物的合成等。脂肪酶被廣泛應用于糧油生產、食品工業、日用化學工業、油脂化學工業、農業化學工業、造紙工業、洗滌劑工業、以及藥物合成等許多領域，是重要的工業酶制劑之一。脂肪酶催化反應位置特異性是指反應底物甘油三酯中的Sn-1(或Sn-3)和Sn-2位酯鍵的識別和水解的反應性。微生物脂肪酶作用于底物三脂酰甘油的方式因酶的類型而異，具有1，3位置特異性的脂肪酶包括例如米黑根毛霉(Mucor?miehei)和戴爾根霉(R.delemar)等產生的脂肪酶。具有1，3-位置特異性的脂肪酶可用于結構油脂生產，特殊脂肪酸、單甘酯的合成以及立體選擇性化學合成和拆分，在工業生產中具有巨大的應用潛力。因此，選育1，3-特異性脂肪酶的菌種及開發相應脂肪酶，具有重要的工業價值和意義。

發明內容

本發明提供一種緊密枝頂孢霉(Acremonium?strictum)菌株，其于2010年12月09日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏登記號為CGMCC?4420。

本發明提供一種脂肪酶，其具有1，3-特異性。

在一個實施方式中，本發明提供一種脂肪酶，其具有下述一種或多種特征：

a.最適作用溫度為30-50℃；

b.最適作用pH為6-10；

c.在pH?7.0-pH?11.0穩定；

d.在40℃以下穩定；和/或

e.1，3-特異性。

在一個優選實施方式中，所述最適作用溫度為30℃、35℃、40℃、45℃、50℃或其間任何范圍。在另一個優選實施方式中，所述最適作用pH為6、7、8、9、10或其間任何范圍。在另一個優選實施方式中，本發明脂肪酶在pH?7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0或其間任何范圍下穩定。在另一個優選實施方式中，本發明脂肪酶在40℃、35℃、30℃、25℃、20℃、15℃、10℃、5℃、0℃或更低溫度下穩定。

在一個實施方式中，本發明提供一種脂肪酶，其是本發明緊密枝頂孢霉菌株2823產生的。

另一方面，本發明提供一種產生脂肪酶的方法，所述方法包括發酵本發明緊密枝頂孢霉菌株和收集發酵上清液。在一個優選實施方式中，本發明所述方法還包括純化步驟。在一個優選實施方式中，發酵步驟在20-50℃，例如，20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃或其間任何溫度范圍下進行。在另一個優選實施方式中，發酵步驟在搖床中進行。在另一個優選實施方式中，發酵步驟進行10-100小時，例如10小時、20小時、30小時、40小時、50小時、60小時、70小時、80小時、90小時、100小時或其間任何范圍。在一個優選實施方式中，收集上清液的步驟通過離心或移液器吸取進行。在一個優選實施方式中，純化步驟通過柱層析進行。在一個優選實施方式中，利用本發明方法得到的脂肪酶具有如上所述的任何本發明脂肪酶的特征。

附圖說明

圖1是緊密枝頂孢霉2823的菌種顯微形態。

圖2是緊密枝頂孢霉2823產生的脂肪酶的酶活與溫度的關系曲線。

圖3是緊密枝頂孢霉2823產生的脂肪酶的酶活與pH的關系曲線。

圖4是緊密枝頂孢霉2823產生的脂肪酶的穩定性與溫度的關系曲線。

圖5是緊密枝頂孢霉2823產生的脂肪酶的穩定性與pH的關系曲線。

圖6是緊密枝頂孢霉2823產生的脂肪酶水解三油酸甘油酯的產物的TLC結果，其中1是油酸；2是0.5h反應產物；3是3h反應產物；4是9h反應產物；5是24h反應產物；6是無脂肪酶對照(孵育0.5h)；7是脂肪酶對照(24h)(無活性脂肪酶，將該菌株產生的粗酶液煮沸10-15分鐘，采用pNPP法檢測確認酶失去活性，以無活性的酶液作為對照)；8是2-MAG(2-油酸單苷酯)；9是DAG(1，2(2，3)油酸苷二酯)。

菌種保藏