[發明專利]檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒及其擴增方法和檢測方法

無效

• 申請號: 201110446187.4
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN103184267A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 韓俊領;杜宏偉;周毓玲;崔麗娟
• 申請（專利權）人: 協和干細胞基因工程有限公司;天津濱海協和基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

1.一種檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒在一個PCR反應中對ADH1B基因上rs1229984SNP位點進行分型。

2.根據權利要求1所述的檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測ADH1B基因rs1229984SNP位點的外側雙向引物和2條雙向序列特異性引物。

3.根據權利要求2所述的檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述檢測ADH1B基因rs1229984SNP的引物堿基序列如下所示：

外側正向引物：AGGGTACAATACATGAGTGCCTGAATGCA

外側反向引物：GTAGGGATTAGTAGCAAAACCCTCAAA

突變型引物：AACCACGTGGTCATCTGTGC

野生型引物：TAGGTGGCTGTAGGAATCTGTCA。

4.一種權利要求1所述的檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒所采用的檢測方法，其特征在于，對受檢樣本DNA用擴增緩沖液進行擴增，擴增后經凝膠電泳在紫外光下見到根據片段大小區分開的產物條帶，擴增片段由大到小依次是：內對照459bp，野生型產物337bp和突變產物164bp，根據條帶的有無判斷SNP位點的基因型。

5.一種采用權利要求1所述的檢測乙醇脫氫酶1B基因多態性的試劑盒的擴增方法，其特征在于，包括以下步驟：

預變性由1次循環構成，其條件為：

溫度為94℃，時間為5分鐘；

PCR擴增由30次循環構成，其條件為：

變性：溫度為94℃，時間為30秒；

退火：溫度為56℃，時間為30秒；

延伸：溫度為72℃，時間為90秒；

擴增結束后于4℃保存至電泳檢測。