[發明專利]一種酶制劑及其用于提取葛根總黃酮的應用和方法

無效

• 申請號: 201110445541.1
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN102492666A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 劉敏堯;劉靚;劉宇;宋海瓊;劉海慶;李文歡
• 申請（專利權）人: 天津濱海諾奧酶工程技術有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N9/42;C12N9/50;C12N9/26;A61K36/48;A61P9/10;A61P9/12;A61P29/00
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技術領域

本發明涉及一種酶制劑及其用于提取葛根總黃酮的應用和方法。

背景技術

葛根(Puerana?labata)是豆科葛屬多年生藤本植物，是一種傳統的中藥材，其總黃酮是葛根中主要有效成分，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。作為醫藥和保健食品的原料或添加劑，目前，葛根總黃酮國際市場需求量約500～800噸/年，我國需求量約150噸/年，葛根總黃酮的開發越來越引起研究者及開發商的關注。

傳統的提取分離方法，如煎煮法、浸漬法、滲濾法、回流法等，存在有效成分提取率不高、雜質清除率低等問題。酶工程技術是近幾年來用于重要工業的一項生物工程技術。通過酶反應溫和地將植物組織分解，加速有效成分的釋放提取，選用相應的酶可將影響液體制劑澄清度的雜質如淀粉、蛋白質、果膠等分解去除，并且針對根中含有脂溶性成分多，通過葡萄糖苷酶或轉糖苷酶，使脂溶性成分轉化成水溶性糖苷類，酶反應提取溫度低，可破壞植物細胞壁，促進有效成分提??；改變提取的目的成分的性質，加強藥物活性；去除體系內雜質，提高提取體系澄清度、改變藥材質地。

發明內容

本發明的目的在于提供一種酶制劑，并將其應用在提取葛根總黃酮，進一步給出了具體的操作方法，該方法能在溫和的條件下對植物有效成分進行高選擇性轉化，不僅可以克服工業中常用的醇水提取方法中有效成分提取率低、工序復雜等問題，提高提取體系澄清度、改變藥材質地，還可以在提取中改變原有天然成分的結構，增加提取物的生理活性，具有潛在的工業應用價值。

為實現該目的，本發明采用以下技術方案：

一種酶制劑，其特征在于：包括以下重量份的組分：

所述蛋白酶選用木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一種。

所述淀粉酶選用中溫α-淀粉酶和β-淀粉酶中的至少一種。

上述酶制劑用于提取葛根總黃酮的應用。

上述酶制劑用于提取葛根總黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將葛根烘干粉碎，過篩，取葛根粉加入蒸餾水溶解；

(2)調節pH至4.0-6.0，加入一定量的酶制劑，在40-60℃的溫度下酶解1-6小時；

(3)高溫滅酶；

(4)離心，沉淀用70％乙醇加熱回流提取1-3h，過濾，提取2-4次。

(5)合并上清液和濾液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液為葛根總黃酮浸膏。

上面提到的提取葛根總黃酮的方法中，所述植物粉碎至40-100目，植物材料與加入的蒸餾水的質量比為1∶10-30。

所述的酶制劑與蒸餾水的質量比為1∶5-15。

步驟(2)中所述的酶制劑添加量為葛根粉添加量的0.1-1％。

步驟(3)中所述的滅酶溫度為80-100℃，時間5-10min。

步驟(4)中所述的70％乙醇與沉淀的質量比為1∶8-15，回流提取溫度為60-80℃。

本發明選用此種酶制劑的原理是：纖維素酶，可以降解植物纖維素；木聚糖酶可以水解植物中的木聚糖；蛋白酶，可以水解提取物中的蛋白質，提高提取物的純度；淀粉酶，可以水解淀粉。這幾種酶相互作用，能夠破壞葛根細胞壁的纖維結構，甚至將其分解成小分子物質，減少提取傳質阻力，有效釋放葛根黃酮等活性成分；

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

(1)本發明采用酶法提取葛根總黃酮，反應條件溫和，能保持天然產物的構象，不破壞其立體結構和生物活性，有利于保持有效成分原有的藥效。

(2)本發明選用酶不僅能夠去除體系內雜質，提高提取液的澄清度，同時又提高了中藥有效成分的提取率。

(3)本發明對酶制劑的配比、提取時間、提取溫度、加酶量、pH值進行了優化組合，實現了葛根總黃酮提取得率的最大化。

(4)本發明酶制劑用于提取葛根總黃酮的方法中，采用酶提和醇提結合的條件下，提高了活性成分的得率。

(5)采用本發明從中藥葛根中提取總黃酮，葛根總黃酮提取率在7％以上，而一般的水提取法，提取率一般僅為1-2％，醇提取法，提取率一般僅為4-5％，因此酶提法提取得率高。

(6)本發明工藝簡單、操作方便、投資少、不會產生噪音和污染，適應工藝生產應用。

具體實施方式

實施例1

(1)取葛根烘干粉碎至80目，取該粉末10g，加入蒸餾水100mL溶解；