[發明專利]雪松疫霉的分子檢測方法及其引物

無效

• 申請號: 201110443100.8
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN102424851A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 紀睿;張正光;廖太林;李百勝;王健生
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國昆山出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種用于檢測雪松疫霉的引物，其特征在于：其上游引物序列如SEQ?ID?No.1所述，下游引物序列如SEQ?ID?No.2所述。

2.一種檢測雪松疫霉的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包含權利要求1所述的引物。

3.一種雪松疫霉的分子檢測方法，其特征在于：提取待測樣品的DNA作為模板，利用權利要求1所述的引物進行PCR反應，取PCR反應擴增產物進行檢測，如果存在分子量約為192?bp的DNA條帶，則證明所檢樣品中含有雪松疫霉。

4.根據權利要求3所述的分子檢測方法，其特征在于：所述PCR反應的擴增體系為：10.0?μL?SYBR?Premix?Ex?TaqTM(2×)，0.4?μL?ROX?Reference?Dye?II(50×)，引物(10?μmol/L)各0.4?μL，模板2?μL，用滅菌水補足體積至20?μL。

5.根據權利要求4所述的分子檢測方法，其特征在于：所述PCR反應的反應程序為：94°C預變性30?s；94°C變性5?s，46°C退火34?s，40個循環；95°C?15?s，60°C?1?min，?95°C?15?s，60°C?15?s。

6.?一種用于檢測雪松疫霉的引物，其特征在于：包括兩對引物，第一對引物其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所述，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所述，第二對引物其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所述，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所述。

7.一種檢測雪松疫霉的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包含權利要求6所述的引物。

8.一種利用權利要求6所述的引物檢測雪松疫霉的方法，其特征在于：提取待測樣品的DNA作為模板，利用權利要求6所述的引物進行套式PCR反應，第一輪PCR反應的模板為提取待測樣品的DNA，引物為所述的第二對引物，第二輪PCR反應的模板為第一輪PCR反應產物，引物為所述的第一對引物，取第二輪PCR反應擴增產物進行凝膠電泳，如果存在分子量約為192?bp的DNA條帶，則證明所檢樣品中含有雪松疫霉。