[發(fā)明專利]丁丙諾啡檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110443053.7
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN102928593A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳立柱;楊利
• 申請（專利權(quán)）人: 北京寶瑞源科技孵化有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)免疫方法的測定技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用膠體金免疫層析技術(shù)制作的一種丁丙諾啡檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

丁丙諾啡是一種兼具有阿片受體激動和拮抗活性的藥物，它是一種高親脂性藥物，注射或舌下含化起效都比較快，低劑量能顯示阿片受體的激動活性，高劑量則出現(xiàn)阿片受體拮抗作用。目前丁丙諾啡有針劑和片劑，許多國家和我國許多地方也都使用丁丙諾啡來對海洛因成癮者進行戒毒治療。但由于它極易形成依賴的特性，因此，各國對它使用情況的控制也極為嚴(yán)格，我國把它列為第1類精神藥品進行管制。

丁丙諾啡除了它的藥用作用外，還有比較嚴(yán)重的副作用，副作用與其它阿片類藥物相似，最常見的有：易成癮、神經(jīng)系統(tǒng)損害、記憶力下降、失眠、嗜睡、出汗、便秘、頭痛、惡心，可能引起高血壓和誘發(fā)高血壓，呼吸抑制等等。據(jù)報道丁丙諾啡有兩種很危險的濫用情況：一是藥片不恰當(dāng)?shù)挠米黛o脈注射或過大劑量的口服；二是與其他鎮(zhèn)靜類藥物(如地西泮、酒精)合用，這樣使用易引起呼吸抑制，昏迷、甚至死亡。所以吸毒學(xué)員在遠(yuǎn)離海洛因毒品的同時也應(yīng)不要濫用“丁丙諾啡”、“安定”以及各種種樣的軟性毒品，同樣它們也身體造成極大的損害。

有關(guān)丁丙諾啡的檢測方法有很多，例如：薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等方法，這些方法雖然檢測的靈敏度較高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，但是存在需要昂貴的儀器設(shè)備，對檢測材料的要求高，需要提純處理等限制。因此研究具有快速、便攜等優(yōu)點的檢測方法具有現(xiàn)實意義。本發(fā)明介紹了一種以膠體金免疫層析法快速檢測丁丙諾啡的檢測試劑盒及其制備方法，該方法具有簡單、快速，無需任何儀器設(shè)備，經(jīng)濟實用等特點，適用于快速定性檢測樣本中是否含有丁丙諾啡。

膠體金免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)九十年代以來在單克隆抗體技術(shù)、免疫層析技術(shù)及膠體金顯色技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項新型體外診斷技術(shù)?；谀z體金免疫層析技術(shù)可以制備膠體金試紙，膠體金試紙的原理是應(yīng)用膠體金標(biāo)記技術(shù)，以膠體金為示蹤物，利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上的顯色而判定檢測的結(jié)果，具有操作簡單、檢測快速、靈敏度高、特異性強，無須復(fù)雜的儀器等特點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種簡單、快捷、靈敏度高、特異性強的丁丙諾啡試劑盒及其制備方法，用于檢測待檢樣本中是否含有丁丙諾啡。

一種用于檢測丁丙諾啡的檢測試劑盒，包括樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸樣墊和PVC支撐板，在PVC支撐板上依次緊密粘附有樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸樣墊。所述樣品墊為玻璃纖維；所述膠體金墊為膠體金標(biāo)記的丁丙諾啡單克隆抗體聚酯膜；所述硝酸纖維素膜上依次包被有檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線)，其中檢測線(T線)上包被了丁丙諾啡-BSA偶聯(lián)抗原，質(zhì)控線(C線)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗體；所述吸樣墊為吸水紙。

本發(fā)明采用納米膠體金技術(shù)及抗原抗體特異性反應(yīng)，應(yīng)用免疫競爭抑制反應(yīng)的原理制備而成，通過待檢樣本中含有的丁丙諾啡與硝酸纖維素膜上檢測線(T線)包被的丁丙諾啡-BSA偶聯(lián)抗原競爭結(jié)合膠體金標(biāo)記的丁丙諾啡單克隆抗體，通過T線的顯色來判定待檢樣本中是否含有丁丙諾啡。

本發(fā)明提供了一種丁丙諾啡檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備丁丙諾啡偶聯(lián)抗原

將丁丙諾啡與BSA偶聯(lián)，合成丁丙諾啡-BSA偶聯(lián)抗原，作為丁丙諾啡偶聯(lián)抗原。

(2)制備丁丙諾啡單克隆抗體

采用丁丙諾啡-BSA偶聯(lián)抗原為免疫原免疫BALB/C小鼠，通過雜交瘤技術(shù)，得到分泌抗丁丙諾啡單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；以體內(nèi)誘生腹水法大量制備抗體，使用Protein?G柱進行純化，獲得丁丙諾啡單克隆抗體。

(3)制備膠體金

取90ml純化水于潔凈的圓底燒瓶中，于電磁加熱套中攪拌并加熱，等待沸騰后，加入4ml?1％的氯化金溶液，繼續(xù)攪拌1min，迅速加入6ml?1％的檸檬酸三鈉，溶液顏色由淺黃變成黑色最后變成酒紅色，繼續(xù)加熱5min，取出冷卻到室溫，常溫避光保存。這樣制成的膠體金顆粒的大小為20-40nm。

(4)制備膠體金墊