[發明專利]一種利用SSR分子標記技術快速鑒定柳枝稷雜交種的方法

無效

• 申請號: 201110442587.8
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN102703579A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 黃琳凱;張新全;張婧;曾兵
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用SSR分子標記技術快速鑒定柳枝稷雜交種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A1，基因組DNA提取：

以待鑒定的柳枝稷植株幼葉或種子為材料，采用植物基因組DNA提取試劑盒提取DNA；提取的DNA用0.8％的瓊脂糖凝膠電泳進行純度的檢測；將DNA樣品置于-20℃冰箱保存；待開始實驗時，將各個DNA樣品取出一部分稀釋至20ng/μL，放于4℃冰箱保存并使用；

A2，SSR分析：

利用篩選得到的可以用于柳枝稷雜種鑒定EST-SSR標記引物：

primer1-F：5’-AGTTTGAGCTTTGTGTTTTTG-3’，

primer1-R：5’-CAACAATTTGGTTTCAACAAG-3’；

進行雜種鑒定；PCR反應擴增體系20μL：DNA?2μL(20ng/μL)，2×Taq?PCRMasterMix?10μL，上下游引物各1μL(10μmol/L)，滅菌水補齊20μL；

EST-SSR?PCR反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性1min，52℃退火1min，72℃延伸1.5min，共35個循環；最后72℃延伸10min，4℃保存。

電泳分離：最后PCR擴增產物采用1.8％的MetaPhor瓊脂糖凝膠進行電泳分離，0.1mg/mL的溴化乙錠染色，120V電壓在0.5×TBE緩沖液中電泳約1.5h，電泳結束后凝膠在凝膠成像系統中照相并保存；或者用PCR擴增產物在6％的聚丙烯酰胺凝膠(丙烯酰胺∶甲叉＝19∶1，7.5mol/L尿素，1×TBE緩沖液)上用1×TBE緩沖液進行垂直電泳分離。首先在正極緩沖液中加入EB(終濃度：0.75μg/ml)，用300伏電壓跑45分鐘，然后點樣，300伏電壓跑2小時。電泳結束后凝膠在凝膠成像系統(Bio-rad)中照相并保存。

A3，雜種鑒定：在雜交后代的擴增產物中，若具有父本特異條帶，則為真雜種，反之，則為假雜交種。