[發(fā)明專利]胃黏膜樣品中幽門螺桿菌的免疫測定法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110439792.9
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102565391A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設計）人: 王滔
• 申請（專利權）人: 王滔
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 丁秀麗

技術領域

本發(fā)明涉及一種胃黏膜樣品中幽門螺桿菌的免疫測定法。

背景技術

幽門螺桿菌(Helicobacter?pylori，H.pylori)是一種在人的胃腸道上部發(fā)現(xiàn)的細菌，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它與胃十二指腸疾病如消化性潰瘍、胃炎和其它疾病有關。按來源把該細菌屬彎曲桿菌屬，然后根據(jù)有關它的超微結構和脂肪酸組分方面更詳細的資料再分在螺桿菌屬。

幽門螺桿菌的檢測方法很多，常用方法有：(1)細菌培養(yǎng)法。該方法是診斷幽門螺桿菌的“黃金標準”。該方法能直接證明H.pylori的存在，無假陽性出現(xiàn)，同時還可作藥敏試驗。對不同菌株作遺傳因子研究。但是，分離培養(yǎng)技術條件較高。且需一定的培養(yǎng)時間，可有假陰性出現(xiàn)，尚未能廣泛開展。(2)尿素酶試驗。幽門螺桿菌能夠產生大量很高活性的尿素酶，而其他細菌罕有如此高的尿素酶活性。基于此原理，多采用pH＜6.0，一般情況下試劑顏色不變。如果胃內有H.pylori感染，當標本放人試劑中，H.pylori所產生的尿素酶則分解尿素產生氨，使pH升高，導致劑酚紅變色-粉紅色。尿素酶試驗方法簡便實用、快速靈敏。能在1分鐘內判斷結果，且鏡檢完后就可及時治療。(3)組織病理學檢查方法較多，有HE染色、Warthin-Starry染色、Giemsa染色、石炭酸復紅染色、Gimenez染色、吖啶橙染色、間接免疫光法、相差顯微鏡觀察、無標記抗體PAP染色法、雙特異抗體酶免疫染色法、寡核苷酸探針檢查等方法。以Warthin-Starry染色、Gimenez染色效果最佳而常用。但是該檢測方法繁瑣費時，需要一定的技術，有一定的假陽性。(4)呼氣試驗。感染H.pylori的患者口服同位素標記的尿素溶液。則尿素分解后產生的同位素CO₂從肺呼出。

對于已經(jīng)做胃腸鏡檢查后的所獲得的胃黏膜活檢標本，主要采用快速尿素酶法和病理檢測兩種方法檢查可能存在的幽門螺桿菌。一般而言，這兩個檢測方法具有較高的一致性，但是，并不是可以相互取代，仍然有不一致的地方。不一致的原因可有：(1)H.pylori胃內分布有差異，快速尿素酶法是檢測一塊組織。存在標本取樣能否取到的問題，而病理只是一塊組織幾塊切片，取樣的問題更為突出。(2)尿素酶活性和H.pylori的不一致。雖然H.pylori能夠產生大量很高活性的尿素酶，而其他細菌罕有如此高尿素酶活性。但是目前發(fā)現(xiàn)，抑酸藥物、一些抗菌素等會影響尿素酶試驗，而抑酸藥物有可能為患者服用。(3)pH法，因為其他混雜的尿素酶，顏色判斷的視覺誤差等存在假陽性。(4)病理形態(tài)學上可有其他相似的螺桿菌、弧菌等干擾。正是因為這個原因，1999年4月中華醫(yī)學會消化病學分會在《幽門螺桿菌若干問題共識意見》中提出，H.pylori培養(yǎng)陽性或下列4項中任2項陽性者，診斷為H.pylori陽性：(1)H.pylori形態(tài)學(涂片、組織學染色或免疫組法染色)；(2)尿素酶依賴試驗(快速尿素酶試驗)；(3)血清學試驗(ELISA或免疫印跡試驗等)；(4)特異的PCR檢測。H.pylori感染的臨床診斷標準，下列2項中任1項陽性者，診斷為H.pylori陽性：(1)H.pylori形態(tài)學(涂片或組織學染色)；(2)尿素酶依賴性試驗(快速尿素酶試、13C-UBT)。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種成本低廉，檢測結果直觀、準確的胃黏膜樣品中幽門螺桿菌的免疫測定法。

本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：它包括以下步驟：

(a)制作帶檢測物質的樣品稀釋液；

(b)把該稀釋液中的胃黏膜樣品與抗幽門螺桿菌抗原的第一種多克隆抗體接觸以形成抗體-抗原復合體；

(c)把步驟(b)的樣品和步驟(b)所得到的抗體-抗原復合體進行分離；

(d)把步驟把步驟(c)得到的分離后的抗體-抗原復合體暴露于抗幽門螺桿菌抗原的第二種多克隆抗體并把抗幽門螺桿菌抗原的第二種多克隆抗體的一部分與復合體反應，其中所述的第一種多克隆抗體和第二種多克隆抗體中的其中一種多克隆抗體結合在一種固體載體上，而另一種多克隆抗體用一種檢測劑進行標記；

(e)測定標記的抗體的量。

其特征在于：所示的樣品稀釋液制作方式為把懷疑含有幽門螺桿菌的一種胃黏膜樣品懸浮于基于蛋白質的、含堿性物質的稀釋液中。